Western Blot试剂的准备

1. 30%储备胶溶液： 丙烯酰胺（Acr） 29.0g　　　　　　　　　　　亚甲双丙烯酰胺（Bis） 1.0g　 混匀后ddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于室温。

2. 4×分离胶缓冲液（1mol/L Tris-HCl PH 8.8） Tris 18.17g加ddH2O溶解，浓盐酸调PH 8.8，定容至100ml。

3. 4×浓缩胶缓冲液（0.5mol/L Tris-HCl PH 6. 8） Tris 12.1g加ddH2O溶解，浓盐酸调PH 6. 8，定容至100ml。

4. 10%SDS：电泳级SDS 10.0g加ddH2O，68℃助溶，浓盐酸调PH 7.2，定容至100ml。

5. 5×电泳缓冲液（PH 8.3）： Tris 15.2g 甘氨酸 94g ddH2O 定容到1000ml SDS 5g　　先在974ml蒸馏水中加入Tris碱，待溶解完全后，再加甘氨酸，最后加SDS。

6. 10%过硫酸铵（AP）：0.1g AP加ddH2O至1.0ml，4℃保存，要在一周内使用，最好新鲜配制。

7. 2×加样缓冲液：2×SDS加样缓冲液　　　0.5mol/L Tris-HCl (PH 6.8) 2ml　　　10%SDS 4 ml　　　β-巯基乙醇 1ml　　　甘油 2ml　　　1%溴芬蓝 1ml　　　置4℃避光保存

8. TEMED：注意室温较低时TEMED量可加倍，最后灌胶之前再用

9. 转膜缓冲液(Towbin transfer Buffer)： 即1×SDS-PAGE

10. 0.0 1mol/L PBS (PH 7.4) ： NaCl 8.5g　　　　　　　　　　　　　　　(12H2O)Na2HPO4 2.9011g　　　　　　　　　　　　　　　(2H2O)NH2PO4 0.24g　　　　　　　　　　　　　加ddH2O定容至 1000ml

11. 封闭液: 1×PBS中加入 30ml　　　　　　　　　　　5%（V/V）脱脂奶粉 1.5g　　　　　　　0.02%叠氮钠 0.006g　　　　　　　0.05%Tween-20 0.015g

12. 漂洗液（PBST）：含0.05% Tween-20的PBS溶液　　每1000 ml PBS溶液中加0.5 ml Tween-20

13. 水饱和正丁醇： 正丁醇 50 ml　　　　　　　　　ddH2O 5 ml 加入瓶中震荡，使结合，存于室温。　　用时取上面一相加在凝胶上面。

14. 考马斯亮蓝染色法试剂：一般用G250考马斯亮蓝（蛋白定量专用）染色液： 90 ml甲醇：水（1：1，V/V）和10 ml冰乙酸的混合液中溶解G250马斯亮蓝0.25g，用Whatman 1号滤纸过滤染液以去除颗粒状物质。（染色液多次回收利用）　　　　　　　　　脱色液：90 ml甲醇：水（1：1，V/V）和10 ml冰乙酸的混合液

15. 丽春红S染色色法试剂：2%乙酸，　　　　　　　　　　　　　0.5%丽春红的水溶液　　脱色液：TBS

16. Aprotinin:为一58氨基碱性多肽，经反复冻融后，会发生集聚，储存液应分装成小份，保存于-20度，每一小份用后应予废弃。

17. PMSF：在溶液中不稳定，应在临用前从储存液中现加于裂解液中。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量的水冲洗。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF通常配成10mmol/L浓度储液（1.74或17.4mg/ml溶于异丙醇中）保存于-20度。

18. 显色液：联苯胺显色液（DAB）　　　　　DAB 2ml　　　　　10%H2O2 60μl　　　　　PBS(0.1mol/L PH6.4) 10ml

19. 三去污裂解缓冲液 0.5mol/L Tris-HCl(PH 8.0) 0.785g/100ml 0.15mol/L NaCl 0.8775 g/100ml 0.02%叠氮钠 0.02 g/100ml 0.1%SDS 0.1 g/100ml