凝胶层析法蛋白质脱盐

  一、原理：含盐蛋白质溶液流经凝胶层析柱 时，低相对分子 量的盐分子 因浸入凝胶颗粒的微孔中，所以向下移动的速度较慢；而大分子的蛋白质不能进入凝胶颗粒的微孔，以较快的速度流过凝胶柱，从而使蛋白质与盐分开。 二、材料与试剂：葡聚糖凝胶（Sephadex G25）、洗脱液（蒸馏水或适宜的缓冲溶液）、含盐的蛋白质溶液、蛋白质检测试剂、无机盐检测试剂（依具体情况而定） 三、操作方法 1、凝胶的准备：称取葡聚糖5g，加入80ml洗脱液（可用水或适宜的缓冲液），在沸水浴中溶胀30min，用倾泻去悬浮的小颗粒。然后装进内径1－1.2cm，高30－40cm的玻璃柱内。注意装填均匀，无气泡和裂纹存在，并保持液面在凝胶表面以上。 2、加样与洗脱：打开柱的出口，让柱内的液体慢慢流出，直至液面与凝胶床表面相平，然后加入2ml含盐蛋白质溶液，至样品液面刚好到达凝胶床表面时，加入30ml洗脱液（与溶胀和装柱时所用液体完全相同），以0.5－1ml/min的流速洗脱，每5ml装试管分布收集。 3、收集的蛋白质溶液可用280nm处的紫外光吸收法检测，也可用福林酚测定。而盐根据具体的盐确定检测方法。