双缩脲试剂测定蛋白质含量

蛋白质鉴定

一、原理：蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。双缩脲反应是指蛋白质在碱性溶液中与二价铜离子结合，生成紫红色络合物的反应。其颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，而与蛋白质的相对分子 质量 和氨基酸的组成无关。

二、材料与试剂

双缩脲试剂：称取1.50g五水硫酸铜和6.0g酒石酸钾钠(四水)，用500ml左右的蒸馏水溶解，在搅拌下加入300ml10%氢氧化钠溶液，定容至1L,储存于塑料瓶中。可长期使用。若出现黑点或红色沉淀时，则不能再用。加入0.1%KI可防止铜的析出。

1%标准酪蛋白溶液：用0.05M氢氧化钠溶液配制，酪蛋白的纯度可用微量凯氏定氮法。

试管、分光光度计

三、操作过程

1、标准曲线的制作：于试管中分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml的1%标准酪蛋白溶液，用水补足1ml。然后各加入4ml双缩脲试剂，充分摇匀在室温下反应30min，于540nm波长下测定光吸收率。以酪蛋白的含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

2、样品测定

取样品溶液1ml加入4ml双缩脲试剂，摇匀后在室温下反应30min，测定光吸收值，从标准曲线查出蛋白质含量。