酵母蛋白的提取方法

1 准备SD/-Leu或是YPD 培养基20ml，酵母过夜培养，30℃，230rpm。 2 测OD600 约1.0。 3 100ml过夜培养物，1000g，离心，5min，4℃。 4 弃上清，重悬于80ul抽提buffer： 0.1M Tris-Cl（PH7.5），0.2M NaCl，0.01Mβ-ME，20％甘油，5mM EDTA，1mM PMSF。(100×)：PMSF 0.1742g 溶于10ml 异戊醇（主要抑制丝氨酸蛋白激酶）， RT保存。 5 转移上清到一预冷的玻璃管中，再加入玻璃珠33ul（425-600um）。冰上操作，涡流10min，但不包括样品的预冷时间。 6 回收玻璃珠，并尽可能取上清到另一预冷的玻璃管中。 7 40ul的抽提buffer，同上涡流。 8离心后分离上清（回收玻璃珠）。 9液氮快速冷冻，-70℃储存。 10 提取的蛋白量通常约10-20mg/ml, 2-5ul用于实验。