羧肽酶的制备及其性质

【目的要求】 1. 实验目的 ⑴ 通过学习生化及相关学科的理论和技术，熟悉并进一步掌握酶的提取、分离、纯化、检测及其生物学性质和理化性质的实验技能。 ⑵ 初步培养从总体水平进行实验的设计，进一步加强并提高综合分析解决问题的能力。 ⑶ 培养科研工作中的协作精神和勤俭而高效的科研作风。 2. 实验要求 ⑴ 本实验由面包酵母为初始材料，制备高纯度羧肽酶Y，对羧肽酶Y生化性质的检测。 ⑵ 通过相关文献资料的收集、分析、设计本实验的可行报告。 ⑶ 可行性报告包括实验目的、意义、国内外进展、实验方法和技术路线及可行性分析、实验预期结果。 ⑷ 在本实验开始前一个月，将实验报告草案提交指导教师，以审核和准备实验材料等。 ⑸ 实验报告草案应提供最少十篇文献，其中至少有两篇是近五年内的文献，包括新技术、新方法在生物大分子研究中的应用。 (6) 文献按学术期刊论文的格式要求，即作者、文章名、刊名、年、卷(期)、页码，参考书籍类同。 ⑺ 本实验基本两人一组，在部分实验中需几组合作进行。 ⑻ 实验报告包括：采用实验的原理；实验所需试剂、仪器、设备；提取、分离、纯化的每步骤的蛋白回收率、活性回收率，最终产率；按实验内容，提供实验结果及相关图表；完成实验后从整体上进行相关的讨论。 【实验内容】 1 ．羧肽酶Y活性检测 ⑴ 酶活力测定方法 ⑵ 酶活力单位定义 ⑶ 比活力定义 ⑷ 蛋白含量测定方法 2. 面包酵母羧肽酶Y的提取 ⑴ 每组500克新鲜面包酵母 ⑵ 利用溶解度等原理进行羧肽酶Y提取 ⑶ 羧肽酶Y的活化 3. 羧肽酶Y的分离、纯化 ⑴ 利用各种方法，从上述提取液分离羧肽酶Y ⑵ 每步纯化前蛋白纯度检测 ⑶ 分离纯化过程中跟踪检测活性组份蛋白质含量和酶活性 4. 羧肽酶Y理化性质  ⑴ 采用两种方法验证羧肽酶Y纯度 ⑵ 羧肽酶Y的分子量测定 ⑶ 羧肽酶Y的等电点测定 5. 羧肽酶Y的酶学性质 ⑴ 在活力单位定义确定后，求出羧肽酶Y的Vmax和Km ⑵ 初步确定羧肽酶Y的最适pH ⑶ 初步确定羧肽酶Y的最适温度    ⑷ 提出最少两种羧肽酶Y的可逆抑制剂并验证抑制类型 ⑸ 提出羧肽酶Y的激活性并验证   (6) 羧肽酶Y的热稳定性