异构酶的测定实验-葡萄糖异构酶的测定实验

D-葡萄糖 ⇌ D-木果糖

材料与仪器

步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」

实验步骤与木糖异构酶基本相同，唯一不同的是在酶反应以及加完半胱氨酸后，咔唑和硫酸混合物可以放置 30 min 进行颜色反应，并且在 560 nm 处测吸光值，用 D-果糖准备校对曲线。

常见问题

试剂：

0.2 mol/L TES/NaOH，pH 8.0［N-tris（羟甲基）-甲基-2-氨甲基酸，Mr＝229.3；9.2 g 溶于 100 ml 水中，用 1 mol/L NaOH 调节至 pH 8.0，用水加至 200 ml］

2 mol/L D-葡萄糖（Mr＝180.2；7.2 g 溶于 20 ml 水中）

0.03 mol/L CoCl2（含六分子水，Mr＝237.9；71 mg 溶于 10 ml 水中）

1.5％ 半胱氨酸·HCl（半胱氨酸·HCl-水合物，Mr＝175.6；溶解 1.5 g 在 100 ml 水中）

0.12％ 咔唑溶液（Mr＝167.2；120 mg 溶于 100 ml 乙醇中）

70％ 硫酸