尼氏染色实验

尼氏染色法(Nissl Staining)是用碱性染料染神经组织的一种方法。尼氏体是胞质内的一种嗜碱性物质，广泛见于各种神经元，不同神经元中的尼氏体形状、大小和数量则各有差异。用于尼氏染色的碱性染料主要有焦油紫、亚甲蓝、甲苯胺蓝和硫堇等。我室主要用焦油紫和硫堇染色。尼氏染色法可以染出尼氏体，用来观察神经元内的细胞结构；还可以通过尼氏染色后对尼氏体的观察来了解神经元的损伤情况

材料与仪器

神经元
焦油紫 硫堇

步骤

(1)石蜡或冰冻切片依次经二甲苯、无水乙醇、95%酒精、80%酒精、70%酒精和蒸馏水，各自时间可以参考HE染色。

(2)1%焦油紫或1%硫堇染色10min至1h。

(3)蒸馏水清洗。

(4)70%酒精分色数秒至数分钟。

(5)依次经70%酒精、80%酒精、95%酒精，各2min脱水。

(6)无水乙醇2次，每次5min。二甲苯2次，每次10min。

(7)DPX封片。尼氏体呈紫色、细胞核呈淡紫色

注意事项

(1)切片若为石蜡切片，要在二甲苯中先脱蜡。

(2)焦油紫或硫堇的染色时间也是根据染液配制时间的新旧、切片厚度和环境温度灵活掌握。

试剂准备：

(1)焦油紫溶液1g焦油紫溶于100ml蒸馏水，溶解后过滤待用。

(2)硫堇溶液1g硫堇溶于100ml蒸馏水，溶解后过滤待用。

常见问题

(1)应该在显微镜下观察分色程度，使尼氏小体呈深色而背底基本无色为最佳。如分色不够，可以退回酒精再次分色。如分色过度，也可退回再染。

(2)尼氏染色应充分脱水，否则容易褪色。

(3)HE染色方法虽然也能观察到胞质中嗜碱性颗粒，但结构不甚清晰，神经元的轴突、树突难以辨认。在尼氏染色中尼氏体清晰可辨，而且很容易区分轴突和树突。尼氏染色中尼氏体受染后呈块状（形如虎斑）或颗粒状，核周围尼氏体颗粒较大，近边缘处较小而细长，如在生理情况下，尼氏体大而数量多，反映神经细胞合成蛋白质的功能较强，在神经元受损时，尼氏体的数量可减少甚至消失，实验者可以根据实验目的选择HE染色和尼氏染色。