蛋白酶的测定实验-偶氮酪蛋白测定法

酪蛋白的敏感性鉴定可以通过这个实验得到很大程度的改善。含氮的基团与酪蛋白的共价键被蛋白水解时切断，用 TCA 上清液测定它们的颜色变化。

材料与仪器

蛋白酶溶液
磷酸钾 偶氮酪蛋白（磺胺偶氮酪蛋白） 三氯乙酸
分光光度计

步骤

0.5 ml 偶氮酪蛋白溶液

0.2 ml 蛋白酶溶液

25℃ 时培养 30 min 后，加 0.2 ml 10％ 三氯乙酸停止反应，离心 5 min。

于 340 nm 处测上清液的吸收值，1U 是指 1 h 内，能使吸收值变化 1 的酶量。

常见问题

试剂：

0.1 mol/L 磷酸钾，pH 8.0

0.2％ 偶氮酪蛋白（磺胺偶氮酪蛋白）溶于 0.1 mol/L 磷酸钾溶液，pH 8.0

10％ 三氯乙酸（TCA，质量浓度）