肝移植动物模型建模实验-二袖套法大鼠原位肝移植模型

二袖套法大鼠原位肝移植模型成模率高，重复性好，改进的大鼠原位肝移植方法手术时间短，稳定可靠。但近交系大鼠手术耐受性差，建模难度大，需要熟练的显微外科技术是模型成功的关键。

原理

二袖套法大鼠原位肝移植模型的基本原理是采用套管重建肝下下腔静脉和门静脉，内支架管重建胆管，肝上下腔静脉直接吻合的原则建立模型。

材料与仪器

器材：

采用 5／7 F 心导管外鞘、22 GA 静脉留滞针外鞘、9-0 无损伤缝线、双人双目手术显微镜、显微外科手术器械、全自动生化分析仪、光学显微镜、雄性 SD 或 Wistar 大鼠等。

试剂：

①乳酸林格液;

②氯胺酮 ;

③生理盐水。

步骤

二袖套法大鼠原位肝移植模型的基本过程可分为如下几步：

（一）清洁级雄性 SD 或 Wistar 大鼠，体重 220～240 g，采用 5／7F 心导管外鞘制成门静脉（portal vein，PV）、肝下下腔静脉（infrahepatic vena cava，IVC）袖套；胆道支架采用 22 GA 静脉留滞针外鞘；9-0 无损伤缝线、双人双目手术显微镜、显微外科手术器械、全自动生化分析仪、光学显微镜等。

（二）供体手术

A 麻醉成功后，腹部横切口进腹，背部垫自制背垫显露肝脏。全身肝素化后，在第一肝门后腹腔动脉上方分离腹主动脉，置线结扎。

B 4 ℃ 乳酸林格液 20 mL 用输液泵经腹主动脉灌注，速度 50～150 mL／h，迅速在左肾静脉上缘剪开 IVC，剪开膈肌离断胸腔段腔静脉，向供肝表面冲浇冰生理盐水。

C 在灌注供肝的同时，按顺时针顺序游离肝周韧带，依次离断左膈静脉、食管入左肝血管支、右肾上腺、右肾及下腔静脉，紧贴膈肌环切断供肝的肝上下腔静脉（suprahepatic vena cava，SVC）。于左、右肝管汇合处远端 0.5 cm 处楔形切开胆总管前壁，向近肝段插入胆道支架，丝线结扎固定。

D 离断肝动脉，近 PV 切断幽门静脉及脾静脉。

（三）供肝修整

A 操作均在 4 ℃ 冰浴中进行。用微血管镊穿过自制袖套管腔，夹住 IVC 断端后拖出外翻于套管壁，刻槽内丝线结扎；同法处理 PV 套管，确保袖套管无扭曲。经 PV 袖套管缓慢注入 4 ℃ 乳酸林格液 5 mL 后，将供肝置 4 ℃ 乳酸林格液中保存。

（四）受体手术

A 乙醚吸入麻醉诱导成功后，腹腔注射氯胺酮 100 mg／kg。

B 腹部正中切口入腹，自制拉钩将肋弓牵开，将剑突向头侧牵引；将肠管推向左下方，以温湿纱布包裹。按顺时针方向游离肝周韧带，结扎左膈静脉、食管入左肝血管支，在右肾静脉上缘平面游离 IVC，断右肾上腺上静脉，充分游离 SVC。

C 游离胆总管，在汇合处切断；游离切断肝固有动脉；在幽门静脉水平上方游离 PV。依次靠近肝脏用血管夹阻断 PV 及 IVC，从 PV 分叉处穿刺注入温生理盐水 2～3 mL，用 Satinsky 钳阻断 SVC，紧贴肝切断 SVC、IVC 及 PV，移去原肝。

D 将供肝置入肝脏原位，用显微钳夹住 PV 套管柄，从 PV 推入温生理盐水 2～3 mL 驱出肝内保存液。

E 用 9-0 尼龙线于供肝膈静脉处腔静脉壁外侧进针，锁边后按「内-外-外-内」的次序连续吻合后壁及前壁，收紧前用含肝素 125 U／mL 的乳酸林格液驱尽腔内气泡，收紧后与预留线头打结。

F 将阻断受体 PV 的血管夹下移至幽门静脉水平，排出 PV 内血液及血凝块，冲洗后迅速插入 PV 袖套，结扎后移去血管夹及 Satinsky 钳，供肝恢复血流，结束无肝期。

G 将受体 IVC 血管夹下移至右肾静脉上缘，去除 IVC 内血凝块，冲洗后立即插入 IVC 袖套，丝线结扎固定。

H 将胆道支架插入受体胆总管腔内，结扎后大网膜覆盖，腹腔注入含青霉素 20 万 U 的温生理盐水 2 mL，关腹。术后予灯烤复温至苏醒，自由进 10％ 葡萄糖水，术后第 1 天自由进食。