单器官移植术-睾丸移植术（组织移植）

睾丸移植术将自体异位睾丸或供者睾丸移植到阴囊里的一种手术。一般分为自体睾丸移植术与同种睾丸移植术。

材料与仪器

器材：

手术显微镜、显微手术器材、生物降温器、CO2 培养箱、光镜、电镜

试剂：

①戊巴比妥钠

②RPMI1640培养液

③Hanks液

④二甲亚砜

⑤小牛血清

⑥青霉素

⑧链霉素

⑨绒毛膜促性腺激素(HCC)

步骤

A. 术前准备

a. 动物准备：

选用雄性体重225-250 g 的成年大鼠作为受体，出生后1-3 天乳大鼠作为供体。以戊巴比妥钠100 mg/kg 腹腔麻醉受体大鼠后，切除双侧睾丸，15 天后自尾部采静脉血，测血清睾酮值。

b. 睾丸组织制备：取出生后1-3 天的大鼠在无菌条件下切除双侧睾丸，立即置入4 ℃ RPMI1640培养液中。用显微手术剪剪成1-2 mm3大小的睾丸组织块备用。

c. 冷冻保存复温培养

冷冻保存：将上述睾丸组织块置入4 ℃的Hanks液内漂洗两次，置入2 ml低温试管中，每管分装l只鼠的双侧睾丸组织块，加冷冻培养液1.5 ml（由培养液RPMI1640配制，内含1.4 mol/L 二甲亚砜、10% 小牛血清、青霉素100 U/ml，链霉素100 U/ml，pH7.2）, 严密封口。

于4 ℃环境下静置30-45 分钟后，再置于生物降温器内按6-8 ℃/min速度降至0 ℃，再按0.4-0.6 ℃/min 速度降至-80 ℃，放入-80 ℃冰箱内保存。

复温与培养：

取冷冻保存的睾丸组织块，在40 ℃水浴槽内转动1 分钟快速复温，吸取试管内的组织块，于室温下置入Hanks液中洗涤3 次。将组织块置入盛有细胞培养液的培养瓶中，再置于充有5% CO2、95% 空气的CO2培养箱内，37 ℃恒温培养48-72小时。

B. 睾丸组织活性鉴定

a. 形态学观察，包括光镜和电镜。

b. 取冷冻保存培养48 小时的标本进行活性测定：分别测培养液中的新鲜睾丸组织和冷冻保存l个月及3个月的睾丸组织的睾酮值。睾酮释放试验：睾丸组织培养48 小时后更换培养液，再添加绒毛膜促性腺激素(HCC)25 U/ml 继续培养3-4小时，再测定培养液内的睾酮值。

C. 睾丸组织移植：

于受体后肢大腿内侧作一纵切口，将睾丸组织置入深浅肌膜之间，术后均不用免疫抑制剂。每只供体的两侧睾丸组织块移植于一个受体，移植后观察。