家兔配子和卵巢冷冻保存技术-家兔精液的冷冻保存

将动物精子进行冷冻和低温贮藏是保存动物基因资源的有效方法。冷冻保存动物的精子与活体保存动物相比，可以大大降低实验经费和动物饲养的空间，减少饲养动物可能存在的各种危险。

例如：可以减少由于饲养不当引起的动物死亡、防止动物间疫病的传播、预防由于繁殖等因素引起近交系动保种基因的漂移等。此外，冷冻精子便于运输和进行国际种质交流。

材料与仪器

器材：

①冻存管

②显微镜

③37 ℃水浴锅

④平皿或载玻片

试剂：

①材料：家兔精液

②液氮

③稀释液：0.10 mol／L的蔗糖、0.25 mol／L的Tris、83 mmol／L的枸橼酸钠、3.50 mol／L的DMSO、10％ 的卵黄。

步骤

家兔精液的冷冻保存的基本过程可分为如下几步：

1．家兔精液的冷冻

（1）采集家兔精液。水浴把冷冻保存稀释液预热到36 ℃，将稀释液按1：1比例缓慢加入经过品质评定的精液中，边加边轻轻摇晃，使精子与稀释液充分混合。

（2）稀释后的精液用0.25 ml细管分装，置于5 ℃平衡30-60分钟。

（3）将液氮倒入准备好的泡沫箱中，将平衡后的细管放置到距液氮面2～5 cm的铁架上，盖上泡沫箱盖子熏蒸15分钟，然后将冷冻细管迅速投入液氮中保存。

2．家兔精液的复苏

（1）解冻时，将液氮中细管快速取出，投入40～41 ℃水中，30秒后拿出，立即用干纱布吸干包好。

（2）剪开细管两头，滴到预先加温至37 ℃的平皿或载玻片上，镜检并记录精液的活率。