小鼠气道哮喘模型的建立及分析实验-小鼠气道哮喘模型炎症分析实验

小鼠雾化刺激两天之后在小鼠气管部位进行插管，用 0.8 ml 的 PBS 对肺部灌洗 3 次，灌洗液可以用于气道炎症因子的分析。

材料与仪器

器材：

静脉留置针、小鼠。

试剂：

① 三溴乙醇（avertin）;

② PBS。

步骤

小鼠气道哮喘模型炎症分析实验的基本过程可分为如下几步：

A 取成年小鼠，以 240 mg/kg 的用量腹腔注射三溴乙醇（avertin）进行麻醉。

B 使用 0.9 mm 直径的静脉留置针（Smiths Medical International Ltd．）进行气管插管。

C 用 1 ml 冰冷的 PBS 对小鼠肺部进行灌洗，来回轻轻抽吸 3 次，取出 700～800 μl 液体，放置在冰上。

D 重复上述步骤两次，每次吸出的液体分别装在 EP 管中。

E 2000 g 离心 6 分钟，将第一管灌洗液（BALF）的上清分装，并马上冻存在-80℃ 冰箱中，可用于 ELISA 检测细胞因子含量。

F 三管细胞沉淀用 500μl PBS 重悬，根据实际情况稀释，用血细胞计数板进行细胞计数。

G 取适当体积的细胞悬液制作细胞涂片，自然晾干后可用甲醇固定，并用 Wright-Giemsa 染色，染色后的涂片可用于免疫细胞分类计数。

注意事项

支气管肺泡灌洗液细胞通过 Diff-Quick（Baxter-Dale，Dudingen，Germany）染色方法进行分类计数。每一张片子上至少数 200 个细胞。剩余的支气管肺泡灌洗液用来做相关炎症因子的分析。通过酶联免疫吸附法对支气管肺泡灌洗液中的 IL-4，IL-6，IL-13 进行测定。图 8-4-4 是 MLCK 基因敲除小鼠诱导的哮喘模型的炎症分析结果。