神经组织观察实验

肋间肌 脊髓灰质涂片 脊髓横切片 神经纵切及横切片 神经纵切片 肠系膜上的环层小体切片 皮肤切片 大脑皮质切片 小脑皮质切片 神经儿胞体 突触 有髓纤维 运动终板
载玻片 盖玻片 眼科镊 显微镜

步骤

一、材料和用具

氯化金法浸染的肋间肌。

脊髓灰质涂片（Niss1染色）、脊髓横切片（Cajal银染色）、神经纵切及横切片（H一E染色）、神经纵切片（银染色）、肠系膜上的环层小体切片（H－E染色）、皮肤切片（银染色）、大脑皮质切片(Golgi或Cox法）、小脑皮质切片（Golgi或Cox法）。神经儿胞体、突触、有髓纤维及运动终板的电镜图片。

载玻片、盖玻片、眼科镊、显微镜。

二、操作

多极神经元

（一）牛的脊髓灰质涂片（Nissl染色）观察

因为是涂片，所以可以较完整地显示出神经元的结构。这种染色可以把胞核及尼氏体（Nissl ’s body）染成蓝色。

1．低倍镜观察 可见染成深蓝色、具有多个突起的多极神经元。选一个比较大而清晰的神经元换用高倍镜观察。

2．高倍镜观察 可见多角形的胞体。在胞体内有圆球形染色较浅的胞核，其中央有一染成深蓝色的核仁。胞质内含有许多不规则的染成深蓝色的小块，即尼氏体胞体周围发出许多突起，这些突起大多为树突，因为轴突只有一根，所以在涂片上有时很难看到。尼氏体在树突内为条状。胞体在一呈圆锥形区域无尼氏体，此处即是轴丘。如看到与轴丘相连的突起，便可断定其为轴突。轴突及轴丘内无尼氏体。

（二）示范观察神经元胞体的电镜结构

用神经元胞体透射电镜图片观察。在胞质内可见大量呈规则平行排列的粗面内质网，高尔基复合体、线粒体、微丝和微管也都较发达。胞核染色质颗粒细小，均散分布，核仁明显，电子密度高。

神经原纤维及突触

（一）猫脊髓横切片（Caial银染色）的观察

在这张切片上可同时观察到神经原纤维及终结（terminal boutton）的形态。

1．肉眼观察 脊髓横切面中央呈“H”形，染成棕黄色的部分为灰质，灰质较宽的一端为脊髓灰质前角。

2．低倍镜观察 在灰质前角处可见大而呈多角形有突起的细胞，为多极神经细胞。找一个突起较多并切到胞核的神经细胞，换用高倍镜观察。

3．高倍镜观察 可以看到胞体和突起内均有棕揭色细丝状的结构，此即神经原纤维。它们在胞体内排列成网状，而在突起内则平行排列。

若切片银染色适当，还可看到在胞体或树突上有许多黑色的小圈状或扣环状结构（形似蝌蚪）既为终结，是光镜下所见到的形成突触的部位。

（二）示范观察突触的透射电镜图片

注意观察突触前膜、突触间隙和突触后膜。在靠近突触前膜的轴质内，可见到许多小囊泡，称为突触小泡，另外还有数量不等的线粒体、微丝和微管。

大脑皮质锥体细胞及小脑皮质梨状神经元

观察猫的大脑皮质及小脑皮质切片（Golgi或Cox法）。这种切片使神经元及神经胶质全成了黑色，分不出胞核和胞质。

（一）大脑皮质锥体细胞

标本的浅层是皮质，在皮质内用低倍镜观察，锥体细胞的胞休形似圆锥，从其尖顶发出一条最粗的树突为顶树突，由顶树突反复分支，逐渐变细。另外还有一些较细的树突从胞体其他部位发出。若切片正切到轴突，则可见一条轴突从锥体细胞的底部发出。换用高倍镜观察树突的分支，可见其表面有许多鼓槌状小突起，为树突棘。

（二）小脑皮质梨状神经元

标本的浅层是皮质，在皮质内用低倍镜观察，梨状神经元的胞体大，似梨形或烧瓶状。从胞体一端发出1~3个粗大的树突，由此树突再反复分支，形成扁柏树枝状，从胞体另一端可看到一条轴突，因切片关系所见到的轴突有长有短。

有髓纤维及神经

（一）兔的坐骨神经纵切片及横切片（H－E染色）的观察

1．纵切片 观察此切片了解神经纤维的结构。

（1）低倍镜观察 可见神经纤维一条一条较紧密地平行排列。选择一条切而较直的神经纤维换用高倍镜观察。

（2）高倍镜观察 在每条神经纤维中央，见一条紫红色的线条为轴突。轴突外围包有髓鞘。髓鞘在制片过程中因类脂质被溶解，因而只剩下红色的蛋白质网状支架。在髓鞘之外很薄的膜为神经膜。每条神经纤维上相隔一定的距离，由于髓鞘中断而形成的缩窄，即是郎飞结（Ranviernode）。两结之间的神经膜含有一个染成蓝紫色椭圆形的胞核，但在切片上不一定都能切到。

2．横切片 观察此切片了解一条神经的结构。

（1）低倍镜观察 在整个神经的外面包有一层结缔组织，为神经外膜。其中含有血管与脂肪细胞等。血管随神经外膜的结缔组织伸入神经内，将神经分成许多大小不等的神经纤维束，包在每个神经纤维束外面的结缔组织为神经束膜。在每个神经纤维束内看到许多小圆圈，即为每一条神经纤维的横切面。每条神经纤维外面还包以一薄层纤细的结缔组织，为神经内膜。

（2）高倍镜观察 每条神经纤维在横切面上呈粗、细不等的圆形．纤维中央紫红色的圆点为轴突，外而围以浅红色网状或无色的髓鞘及神经膜，如果切片正切到神经膜细胞的胞核，则可见染成蓝紫色的胞核。

（二）示范观察髓鞘切迹

取兔的坐骨神经纵切片（银染色）高倍镜观察，在髓鞘上可见到漏斗状的裂隙，即为髓鞘切迹（incisure of myelin）。

（三）示范观察髓鞘的电镜结构

用有髓纤维透射电镜图片观察，可见每个髓鞘横断面在电镜下呈许多同心圆排列的螺旋膜板层状结构。

运动终板

（一）运动终板标本的制作与观察

镊取一小块经氯化金法处理、浸泡十甘油中的兔肋间肌置于载玻片上。加一小滴甘油，盖上盖玻片，用手指轻压盖玻片，把肌组织压碎，便可用来观察。

1．低倍镜观察 骨骼肌纤维呈浅蓝紫色，有的呈紫红色。肌原纤维的横纹清晰可见。神经和神经纤维呈黑色。神经纤维的末端成爪状分支，附于肌纤维表面，与肌纤维附着处形成的椭圆形板状隆起，即为运动终板。

2．高倍镜观察 可见运动终板的爪状分支末端常呈钮扣状膨大

（二）示范观察运动终板的透射电镜图片

可见其轴突终末与肌膜间有间隙，在轴突终末表面有神经膜细胞覆盖。接触轴突终末的肌膜向肌质方向凹陷形成许多小皱褶，轴突终末含丰富的突触小泡、线粒体、微管和微丝等。肌膜下也含丰富的肌质、线粒体和较多的肌纤维胞核。

环层小体

取猫的肠系膜切片（H－E染色）用低倍镜观察，可以找到纵、横切面的环层小体。在纵切面下可见环层小体呈卵圆形。若切面正切到小体的中心，则可见小体的中心为一条棍状结构（内柱），其外周为多层呈同心圆排列的结缔组织纤维层，各层之间夹有扁平结缔组织细胞。在小体一端可见到一条有髓纤维，它在穿过结缔组织纤维板层时失去髓鞘。所以，在内柱中只看到被染为红色的轴突。

触觉小体

用低倍镜观察人皮肤切片（银染色），了解触觉小体的形态及分布。先找到皮肤的复层扁平上皮，上皮下面为结缔组织，结缔组织突向上皮形成许多乳头，在乳头处可找到卵圆形的触觉小体。触觉小体外包有很薄的结缔组织被膜，其中含有横列的扁平细胞，神经纤维呈黑色，盘曲在触觉小体内

神经胶质细胞

用低倍镜7示范观察猫大脑皮质切片（（Golgi或Cox法）。神经胶质细胞有多种，这里只小范观察星形胶质细胞。星型胶质细胞胞体较大，有许多长突起，细胞形态似放射状的星芒。