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非同位素分析报道基因活性实验(萤火虫荧光素酶法)
材料与仪器转染细胞PBS 荧光素贮液 Triton 甘氨酰甘氨酸橡胶细胞刮子 绘图仪 比色杯步骤1. 用冰冷的PBS洗涤在3个60 mm 培养皿中的转染了荧
2024-06-08 24 -
反转录病毒产毒细胞系建立实验(培养细胞的Xgal染色)
材料与仪器转染细胞PBS 戊二醛 低聚甲醛 Xgal溶液培养箱 离心机步骤1. 弃培荞上清并加固定液,室温下,在通风橱中与2%低聚甲醛共育60 min,或与0
2024-06-08 24 -
反转录病毒产毒细胞系建立实验(测定病毒滴度)
材料与仪器病毒原液G418离心机 培养箱步骤1. 感染的前1天按1:10至1:20将靶细胞NIH 3T3分传于6 cm 培养皿中。 2. 进行感染的当天,移
2024-06-08 21 -
反转录病毒载体导入包装细胞系
材料与仪器包装细胞系HEPES CaCl2 甘油 DMSO培养皿 培养板 离心机步骤1. 在转染前1天,在10 cm 培养皿中接种包装细胞,接种密度大约相当于
2024-06-08 24 -
大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验(聚乙二醇相沉淀及层析法浓缩病毒)
材料与仪器病毒PEG NTE转子 离心机步骤1. 制备病毒原液。加5 mol/l NaCl至病毒原液中,4℃不断搅拌,至终浓度达到0.4 mol/l。2.
2024-06-08 25 -
大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验(离心法)
材料与仪器病毒细胞小牛血清滤器 转子步骤1. 将产病毒细胞按1:10或1:20从刚生长汇片的细胞分传至20~50个10 cm 培养皿中,培养细胞至50%~90
2024-06-08 20 -
反转录病毒原液检测实验(在Tris-Tricine缓冲系统中电泳)
材料与仪器蛋白质Tricine样品缓冲液 考马斯亮蓝染色液 乙酸电泳仪 离心机步骤1. 按“Laemmli凝胶电泳法”的步骤1~7,配制溶液并灌制分离胶和积层
2024-06-08 25 -
反转录病毒原液检测实验(反转录酶分析法)
材料与仪器病毒SSC 乙醇滴定板 滤纸 离心机步骤1. 加50 μl RT反应混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每个待测或对照样品占一孔。加10 μl 病毒
2024-06-08 22 -
反转录病毒原液检测实验(通过药物抗性的水平传播分析)
材料与仪器病毒细胞polybrene 小牛血清 DMEM培养皿 滤膜步骤1. 在开始分析的前1天,按1:50将NIH 3T3细胞分传于3个6 cm 培养皿中。
2024-06-08 22 -
克隆化基因的体外转录和翻译实验基本方案
材料与仪器DNATE 核苷三磷酸混合液 RNA聚合酶缓冲液 异丁醇 NaOH TCA离心机 摇床步骤1. 亚克隆编码蛋白质的目的DNA片段于质粒载体的SP6或
2024-06-08 22 -
辅助方案(细胞核提取方法的优化)
材料与仪器细胞核KCl 高盐缓冲液透析膜 离心机步骤1. 按基本方案中歩骤1~7操作。 2. 将细胞核悬液分成5等份。在冷室内不断搅拌,按如下方法在每份悬液
2024-06-08 26 -
核提取物的制备
原理通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。对于特定的蛋白质,影响
2024-06-08 23 -
酶切片断的脱磷实验基本方案
材料与仪器DNA片段碱性磷酸酶 酚 氯仿 EDTA SDS TE缓冲液 电泳缓冲液 NH4AC离心机 恒温设备 真空干燥机 取液器步骤1. 在实验四所得DNA
2024-06-08 23 -
噬菌体铺平板产生噬斑实验(连续稀释法)
原理这种方法能从单个噬斑中分离出纯的噬菌体部落,而且可以对噬菌体母液进行浓度测定。材料与仪器大肠杆菌麦芽糖 培养基平板 微波炉 试管 加热器 毛细管步骤1.
2024-06-08 35 -
多重序列比对及系统发生树的构建实验
原理在现代分子进化研究中,根据现有生物基因或物种多样性来重建生物的进化史是一个非常重要的问题。一个可靠的系统发生的推断,将揭示出有关生物进化过程的顺序,有助于我
2024-06-08 25