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慢病毒滴度的计算
实验准备目标细胞:选择适合慢病毒感染的细胞株(如 HEK293T 或靶细胞)。病毒稀释:对病毒原液进行一系列梯度稀释(如 10−1,10−2,10−3,10−4
2025-01-09 29 -
siRNA是从牵牛花过表达发现的吗
siRNA(small interfering RNA, 小干扰RNA)并不是从牵牛花的过表达现象中发现的,而是从研究植物基因沉默和RNA干扰现象中逐步发展起来
2025-01-09 7 -
哺乳动物细胞同时表达2个质粒,如果采用相同的启动子,会不会形成表达竞争
是的,如果哺乳动物细胞同时表达两个质粒,且这两个质粒使用相同的启动子,它们可能会发生表达竞争(expression competition)。这种情况通常会影响
2025-01-09 5 -
如何做好细胞电转染实验?
要想做好细胞的电转染实验,应注意以下几点:1. 选择合适的电场强度合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低
2025-01-09 8 -
细胞转染应该什么时候加抗生素?
细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源核酸不整合到宿主染色体中,在短时间内在基因或蛋白水平产生较高的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分
2025-01-09 4 -
哪些因素会影响细胞转染实验的效率?
1.细胞密度 一般来说,当细胞密度达到60%~80%时进行转染可以取得较高的转染效率,过低或过高都会影响转染效果。2.细胞状态 这点非常关键,很多时候传代次
2025-01-09 6 -
为什么entranster试剂可以进行有血清细胞转染?
使用脂质体等转染试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,导致转染效率降低,故不能有血清转染。EntransterTM只浓缩包裹核酸不会将血
2025-01-09 8 -
悬浮细胞的siRNA转染实验步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤,以24孔板siRNA转染为例1.提前1天细胞种植悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某
2025-01-09 10 -
细胞培养的无菌技术
微生物无处不在,它们造成污染的可能性也处处存在。细胞培养成功操作最基本的要点是:任何与细胞接触的物品必须是无菌的或没有污染的。要解决培养过程中的污染问题是一件繁
2025-01-09 8 -
血清对于细胞转染效率有什么影响?
血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响转染效率。另外,使用脂质体等转染试剂时,由于含血清转染会将血
2025-01-09 4 -
细胞转染实验的不同方法
1.DEAE-葡聚糖。这是早在1965年出现的转染方法。带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体可以结合带负电的DNA分子,使得DNA复合物结合在带负
2025-01-09 8 -
提高细胞转染效率的要点
1.组织培养试剂优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如,RPMI 1640和D
2025-01-09 8 -
体外培养细胞的一般性质(一)
细胞的存活及生长具有贴壁依赖性绝大多数实体组织来源的细胞,在离开机体、于体外生存生长时,都具有贴壁依赖性,即以单层形式附着在培养瓶或培养皿表面的方式生长。如果无
2025-01-09 5 -
电转染实验时,DNA有什么要求?
使用Entranster-E电转染试剂进行电转染实验时,应使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素,OD值为1.8-2.0。
2025-01-09 4 -
siRNA转染效率不理想的原因
siRNA转染效率不理想,常见的原因有:1. RNA与转染试剂比例不佳由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下
2025-01-09 3