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微生物学

核酸的保存(菌种保藏实验)

2024-05-10 微生物学 加入收藏
一、简介菌种保藏是使微生物种子经过长时间的保存后,仍尽可能地保持其原来性状和活力不变异不死亡、不被污染的过程。保藏的菌种可作为鉴别菌株的对照株,菌种保藏可 深入

一、简介

菌种保藏是使微生物种子经过长时间的保存后,仍尽可能地保持其原来性状和活力不变异不死亡、不被污染的过程。保藏的菌种可作为鉴别菌株的对照株,菌种保藏可 深入研究某菌株的未知性状, 随时为生产、科研提供优良菌种。

 二、操作方法

核酸的保存

 三、原理

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材料与仪器

步骤

1. 以溶液形式置低温保存

DNA 溶于无菌 TE 缓冲液(10 mmol/L Tris • HCl,1 mmol/L EDTA,pH 8.0)中,其中 EDTA 的作用是整合溶液中二价金属离子,从而抑制 DNA 酶的活性(Mg2+ 是 DNA 酶的激活剂)。 TE 的 pH 为 8.0 是为了减少 DNA 的脱氨反应。哺乳动物细胞 DNA 的长期保存。可在 DNA 样品中加入 1 滴氯仿,避免细菌和核酸酶的污染。RNA 一般溶于无菌 0.3 mol/L 醋酸钠(pH 5.2)或无菌双蒸馏水中,也可在 RNA 溶液中加 1 滴 0.3 mol / L VRC(氧钒核糖核苷复合物),其作用是抑制 RNase 的降解。核酸分子溶于合适的溶液后可置 4℃ 、-20℃ 或 -70℃ 条件下存放。4 ℃ 条件下样品可保存 6 个月左右, -70℃ 条件下则可存放 5 年以上。


2. 以沉淀的形式置低温保存

乙醇是核酸分子有效的沉淀剂。将提纯的 DNA 或 RNA 样品加入乙醇使之沉淀,离心后去上清液,再加入乙醇,置 4℃、- 20℃ 可存放数年,而且还可以在常溫状态下邮寄。


3. 以干燥的形式保存

将核酸溶液按一定的量分装于 Eppendorf 管中置低温(盐冰,干冰、低温冰箱均可)预冻,然后在低温状态下真空干燥,置 4℃ 可存放数年以上。取用时只需加入适量的无菌双蒸馏水,待 DNA 或 RNA 溶解后便可使用。

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注意事项

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常见问题

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