酵母基因组 DNA 提取

首先利用含有离液盐的溶液裂解酵母，以确保大分子彻底变性。之后加入乙醇，裂解物离心通过微量离心管时，DNA 会结合到离心柱硅胶模上。在洗涤去除污染物后，将 DNA 用 Tris-EDTA 溶液中洗脱。回收的 DNA 可用于酶切、PCR、Southern 杂交等）。

酵母基因组 DNA 提取试剂盒（试剂盒包含：Buffer GA、Buffer GB、Buffer GD、
Buffer PW、Buffer TE、Proteinase K、吸附柱 CB3、2 ml 收集管）、Lyticase、山梨醇 Buffer。

仪器：离心机

使用前先在缓冲液 GD 和漂洗液 PW 中加入无水乙醇，加入体积参照试剂盒说明即可。

1、取新鲜的酵母菌液 1.5 ml，12 000 rpm 离心 1 min，尽量吸尽上清液。

2、酵母细胞壁的破除：向菌中加入 600 μl 山梨醇 buffer，加入大约 50 U Lyticase，充分混匀。30 ℃ 静置 30 min，4 000 rpm 离心 10 min，弃上清，收集沉淀。

3、向沉淀中加入 200 μl 缓冲液 GA 重悬沉淀，充分混匀。

4、加入 20 μl Proteinase K 溶液，吹打混匀。

5、加入 220 μl 缓冲液 GB，充分颠倒混匀，70 ℃ 放置 10 min，此时溶液应变得澄清透亮，简短离心去除管盖内壁的水珠。

6、加 220 μl 无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心去除管盖内壁的水珠。

7、将上一步所得溶液以及絮状沉淀都加入一个吸附柱 CB3 中（吸附柱放入收集管中），12 000 rpm 离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CB3 放入收集管中。

8、向吸附柱 CB3 中加入 500 μl 缓冲液 GD（使用前先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm 离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CB3 放入收集管中。

9、向吸附柱 CB3 中加入 600 μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm 离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CB3 放入收集管中。该步骤重复操作 1 次。

10、将吸附柱 CB3 放回收集管中，12 000 rpm 离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CB3 置于室温放置 5 分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

11、将吸附柱 CB3 转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50~200 μl 洗脱缓冲液 TE，室温放置 5 min，12 000 rpm 离心 2 min，将溶液收集到离心管中。

12、Nanodrop 2 000 测定基因组浓度，-20 ℃ 存储。