毛细管电泳法分析单链构象多态性实验（基本方案2 应用 ABI 310基因分析仪的自动化毛细管电泳）

PCR 产物 5% 非变性引物
10 X 基因分析仪缓冲剂 Milli-Q 级别的超纯水
ABI PRISM 310 基因分析仪 基因分析仪毛细管 基因扫描分析软件

1.将 PCR 管放在样品槽上。参照制造商的说明书将 ABIPRISM 基因分析仪调至正常状态。安装一个 5 um i.d. 的基因分析仪毛细管，使距离探头 36 cm。在吸管里装上 5% 非变性引物，并且在缓冲腔内加人以基因分析仪缓冲剂。准备样品板。

如果在 5% 非变性引物中使用了 TBE 缓冲剂，那么必须用 1 X TBE 代替 1 X 基因分析仪缓冲剂。

2.在 15°C、25°C 和 35°C 运行毛细管电泳，使用以下参数。

加入时间：15s

加人电压：15kV

运行电压：13kV

运行时间：20 min.

使用设置为 D 的滤光镜检测 FAM、HEX、ROX 指示。

如果安装了冷凝板，就必须降低室温以避免凝聚的水，因为它会导致短路并可能损毁设备。由于电泳时使用了高电压，如果开门使用此设备时一定要谨慎。

3.根据制造商说明书使用基因扫描分析软件分析结果。对每一个电泳温度设定一个大小标准。这些标准里的峰值是由扫描点除以 10 来确定的（扫描点为 3550 的峰值是 355)。使用 DNA 固有的大小标准来校准这些峰值。将未知样本与具有已知^^八序列的正常样本比较。另外，也可以根据制造商说明书使用基因分型软件执行自动化数据分析。

4.用未标记的引物再次放大具有分离的峰值或异常的色移的样本，并且通过 DNA 测序检测突变。