鲑精担体 DNA 制备实验基本方案

1.  将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中，至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反复吹打后，用搅拌棒于4℃搅拌过夜，最终获得一种均匀粘稠液体。 

2.  将一个较大的超声波探头插入烧杯液体中，通过超声波将DNA剪切至2~15 kb（平均7 kb ）大小的DNA片段。

3.  用缓冲液平衡酚抽提，将经剪切的鲑精DNA溶液移50 ml 锥形管中，加入等体积缓冲液平衡酚，混匀后于3 000 g 离心5~10 min（或直到清晰地分相为止）。将含有DNA的上相转移到一个干净的试管中。

4.  再用1：1 （v/v）缓冲液平衡酚/氯仿、氯仿分别抽提，然后将含DNA的上相转移到一个适合髙速离心的离心管中。

 

5.  分别加入1/10体积的3 mol/l 乙酸钠和2.5体积冰冷的无水乙醇，充分混匀后，于约12 000 g 离心15 min。

 

6.  弃上清，用70%乙醇洗涤沉淀并干燥，DNA以无菌的TE缓冲液重溶至浓度为5~ 10 mg/ml。

 

7.  于100℃将DNA变性20 min，然后迅速置于冰浴。用微量离心管分装DNA，于-20℃保存，需要时再取出解冻，用于转化实验之前要重新煮沸。