CaCl2 法制备感受态细胞

【 器材 】 1 ．培养皿 2 ．恒温培养箱 【试剂 】 1 ． LB 培养基 2 ．选择性 LB 琼脂培养平板（含氨苄青霉素，终浓度为 50μg/ml ） 3 ．氨苄青霉素 100 mg/ml 4 ．宿主细菌：经 100 mmol/L CaCl 2 处理的感受态细菌 DH5α

取 50 μL 大肠杆菌感受态细胞，加入适量质粒（体积不得超过 4 μL ）冰浴 30 min 后， 42℃ 热激 90 s ，马上放回冰上，冰浴 2 min ；加 400 μL LB 培养基，于 37℃ 摇床慢摇振荡培养 45-60 min ；取 50-100 μL 涂在含有氨苄青霉素（ 100 μg/mL ）的 LB 固体培养基上， 37℃ 倒置培养过夜。

严格按照顺序加入试剂