核酸纯度、浓度与分子量测定实验（紫外分光光度法）

一、核酸的纯度测定

1.  将分光光度计打开，预热10分钟。

2.  将核酸溶液中取2 µl，加（或纯水）使体积成为100 µl。

3.  将稀释溶液加入石英管，以TE buffer（或纯水）为标准倒入另一管。

4.  在波长260、280 nm 处测定吸光值。

5.  比较在260 nm 及280 nm 之读值。

二、DNA含量和分子量的测定

1.  称取1.5 g 琼脂糖加入盛有100 ml 0.5×TBE电泳缓冲液三角瓶中，摇匀，在微波炉上加热至琼脂糖完全溶解。加入溴化乙锭（EB）至终浓度0.5 ug/ml，并摇匀。 

2.  用胶带将制胶板两端封好，插入适当梳子，将溶解的琼脂糖倒入，室温冷却凝固。 

3.  充分凝固后撕掉两端的胶布，垂直向上小心拔出梳子，以保证点样孔完好。凝胶置入电泳槽中，加0.5×TBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1~2 mm。

4.  用移液器吸取DNA样品8 μl 与 2 μl 的载样缓冲液混匀，小心加入点样孔，蓝色样品混合物将沉入点样孔下部。同时点10 μl DNA Marker作为分子量标准。 

5.  打开电源开关，调节电压至3-5 V/cm，可见到条带由负极向正极移动，约半小时后即可观察。 

6.  在凝胶图象分析仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准比较被扩增产物的大小；同时比较标准浓度及未知浓度的亮度，求取DNA 的含量。