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DNA实验

「彗星」实验带你去看流星雨

2024-09-26 DNA实验 加入收藏
实验原理「彗星」实验又称单细胞凝胶电泳实验,是一种通过检测 DNA 链损伤来判别遗传毒性的技术。它能有效地检测并定量分析细胞中 DNA 单、双链缺口损伤的程度。

实验原理

「彗星」实验又称单细胞凝胶电泳实验,是一种通过检测 DNA 链损伤来判别遗传毒性的技术。它能有效地检测并定量分析细胞中 DNA 单、双链缺口损伤的程度。

当各种内源性和外源性 DNA 损伤因子诱发细胞 DNA 链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、RNA 以及其他成分均扩散到电解液中,而核 DNA 由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。

在中性条件下,DNA 片段可进入凝胶发生迁移,而在碱性电解质的作用下,DNA 发生解螺旋,损伤的 DNA 断链及片段被释放出来。在电泳过程中,这些 DNA 断链及片段带会离开核 DNA 向正极迁移形成「彗星」状图像,而未受损伤的 DNA 部分保持球形。

DNA 受损越严重,产生的断链和断片越多,长度也越大,在相同的电泳条件下迁移的 DNA 量就愈多,迁移的距离就愈长。

通过测定 DNA 迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞 DNA 损伤程度,从而确定受试物的作用剂量与 DNA 损伤效应的关系。该法检测低浓度遗传毒物具有高灵敏性,研究的细胞不需处于有丝分裂期。同时,这种技术只需要少量细胞。

实验材料

1. 研究用细胞或组织;

2. 检测的指标;

3. 请客户提供 DNA 受损详细相关信息或相关文献。

单细胞凝胶电泳实验流程

1. 细胞接种:单细胞凝胶电泳实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行单细胞凝胶电泳实验当天细胞密度应达到 60%~80% 覆盖;

2. DNA 损伤处理;

3. 收集细胞,制备单细胞悬液;

4. 制备胶板;

5. 细胞裂解与电泳;

6. 中和与染色;

7. 荧光显微镜拍照,记录实验结果。

最终结果

1. 阴性对照结果;

2. 具体试验流程 (包括:实验步骤;主要仪器及试剂说明 (含仪器厂家、型号;试剂厂家、批号));

3. 原始实验图片及数据。

相关要求

1. 生长状况良好的细胞株,细胞特性,培养条件及相关注意事项;公司可负责代购;

2. 诱导细胞 DNA 损伤所需试剂、条件等相关背景资料;

交付结果

1. 具体实验报告(包括实验步骤和主要仪器及试剂说明);

2. 实验组和对照组单细胞凝胶电泳图。


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