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DNA实验

凝胶电泳常见问题分析

2024-09-26 DNA实验 加入收藏
要跑琼脂糖凝胶电泳, 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗?能够照相的清楚的条带,至少需要多少量呢?参考见解:5ng 已经可以了,但是或许20ng50ng-200

要跑琼脂糖凝胶电泳, 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗?能够照相的清楚的条带,至少需要多少量呢?

参考见解:5ng 已经可以了,但是或许20ng50ng-200ng效果好,在此范围内呈线性。

把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大浓度的胶和多大的电压呢?

参考见解:可以用琼脂糖凝胶电泳分开,电压不变,可用1.5%到2%的胶,20bp得片断不一定能看得到,所以应用未酶切的PCR片断作对照。

琼脂糖浓度(W/V)大小范围(bp)
0.6%1000-23000
0.8%800-10000
1.0%400-8000
1.2%300-7000
1.5%200-4000
2%100-3000

丙烯酰胺凝胶电泳更适合于分离纯化小分子量核酸(5-500bp)并且分辨率高,可以达到1个bp。所以建议进行丙烯酰胺凝胶电泳试试。

Marker做琼脂糖凝胶电泳,发现Marker在加样孔有一个明显的亮带,什么原因?

参考见解:marker有时会出现这样的问题,应该是时间久了。新买时跑胶在点样孔没有,过一段时间就会在点样孔出现亮点。也可能是蛋白,有时DNA提的不纯含有蛋白时就会出现上样孔有条带的现象。

琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的?

参考见解: DNA带模糊:

1、 DNA降解??避免核酸酶污染。

2、 DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。

3、 所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃,巨大DNA链,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。

4、 DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。

5、 有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。

6、 DNA变性,?电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。

将从组织提取的DNA进琼行脂糖凝胶电泳,用的1.5%的胶加了EB,80V跑1小时,溴酚蓝已经跑到头了,在紫外灯观察什么带也没有,只见孔里面有橘红色的亮光。好象没跑出来,是怎么回事?

参考见解:

1、 根据目的条带长度来调整凝胶浓度,一般1.5%左右,也不一定。

2、 紫外灯下没见带,不一定没有出孔,而是量少看不到,可以测一下浓度看一下,或直接试跑一下PCR。

3、 最好加一个marker孔,尤其你第一次跑胶时。

4、 电泳时间可能过长,一般75v×30min左右,但是具体看溴酚蓝的离孔距离和目的条带离孔距离。


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