实验所用培养基和试剂

1、营养琼脂培养基 成分： 蛋白陈      10 g 牛肉育      3 g 氯化钠      5 g 琼脂        15-20 g 蒸馏水      1000 mL 制法： 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15 ％氢氧化钠溶液约2 mL校正pH至7.2-7.4，加入琼脂，加热煮沸使琼脂溶化，分装于烧瓶内，121 ℃高压灭菌15 min。 注:此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5 ％；如作成平板或斜面，则应2 ％。 2、乳糖胆盐发酵管 成分： 蛋白胨      10 g 猪胆盐(或牛、羊胆盐)      5 g 乳糖        10 g 0.04 ％溴甲酚紫水溶液       24 mL 蒸馏水       1000 mL pH7.4 制法： 将蛋白陈、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10 mL，并放入一个小倒管，115 ℃高压灭菌15 min。 注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。 3、乳糖发酵管 成分： 蛋白胨      20 g 乳糖        10 g 蒸馏水       1000 mL 0.04％溴甲酚紫水溶液       25 mL pH7.4 制法： 将蛋白陈及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装每管30 mL、10 mL或3 mL，并放入一个小倒管，115 ℃高压灭菌15min。 注： ①双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。 ②30 mL和l0 mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3 mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。 4、麦康凯琼脂 成分： 蛋白胨       17g 朊胨       3 g 猪胆盐(或牛、羊胆盐)      5 g 氯化钠      5 g 琼脂        17 g 蒸馏水       1000 mL 乳糖       10 g 0.01 ％结晶紫水溶液      10 mL 0.5 %中性红水溶液      5 mL 制法： ①将蛋白胨、朊胨、胆盐和氧化钠溶解于400 mL蒸馏水中，校正PH7.2，将琼脂加入600 mL蒸馏水中，加热溶解，将两液合并，分装于烧瓶内，121 ℃高压灭菌15 min备用。 ②临用时加热熔化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50 ℃一55 ℃时，加入结晶紫相中性红水溶液，摇匀后倾注平板。结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。 5、伊红美蓝琼脂(EMB) 成分： 蛋白胨      10 g 乳糖     10 g 磷酸氢二钾     2 g 琼脂      17 g 2％伊红Y溶液      20 mL 0.65％美蓝溶液     10 mL 蒸馏水        1000 mL pH      7.1 制法： 将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121 ℃高压灭菌15 min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50 ℃一55 ℃，加入伊红和美蓝溶液，格摇匀，倾注平扳。   6、三糖铁琼脂（TSI） 成分： 蛋白胨     20 g 牛肉膏     5 g 乳糖     10 g 蔗糖      10 g 葡萄糖     1 g 氯化钠      5 g 硫酸亚铁铵[Fe(NH4)2·(SO4)2·6H2O]     0.2 g 硫代硫酸钠     0.2 g 琼脂     12 g 酚红     0.025 g 蒸馏水     1000 mL pH7.4 制法： 将除琼脂和酌红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂，加入0.2 ％酚红水溶液12.5 mL，摇匀，分装于试管内，装量宜多些，以便得到较高的底层。l21 ℃高压灭菌15 min，放置高层斜面备用。 7、克氏双糖铁琼脂（KI） 上层培并基成分： 血消化汤(pH7.6)     500 mL 琼脂     6.5 g 硫代硫酸纳      0.1 g 硫酸亚铁铵     0.1 g 乳糖     5 g 0.3 ％酚红溶液     5 mL 下层培养基成分： 血消化汤(pH7.6)     500 mL 琼脂     2 g 葡萄糖     1 g 0.2％酚红镕液     5 mL 制法: ①取血消化汤按上层和下层的琼脂用量，分别加入琼脂，加热溶解。 ②分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内；将下层培养茬分装于灭菌12 mm×100 mm试管内，每管约2 mL。115 ℃高压灭菌10min。 ③将上层培养基放在56 ℃水浴箱内保温；将下层培养基直立放在室温内．使其凝固。 ④待下层培养基凝固后，以无菌操作将上层培养基分装于下层培养基的上面，每管约1.5mL，放成斜面。 8、半固体琼脂 成分： 蛋白胨     10 g 牛肉膏     3 g 氯化钠    5 g 琼脂     4 g 蒸馏水     1000 mL pH7.5 制法： 按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH7.4-7.6加入琼脂后趁热过滤（若琼脂无杂质可不过滤），分装、包扎、标记，121 ℃灭菌15 min，取出直立凝固备用。 注：供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异等试验用。