反转录病毒原液检测实验（通过药物抗性的水平传播分析）
材料与仪器病毒细胞polybrene 小牛血清 DMEM培养皿 滤膜步骤1. 在开始分析的前1天，按1：50将NIH 3T3细胞分传于3个6 cm 培养皿中。
材料与仪器
病毒细胞
polybrene 小牛血清 DMEM
培养皿 滤膜
polybrene 小牛血清 DMEM
培养皿 滤膜
步骤
1. 在开始分析的前1天，按1：50将NIH 3T3细胞分传于3个6 cm 培养皿中。将1个培养皿标记为阳性对照，1个为阴性对照，1个用于待测病毒原液。
2. 含有选择标记的待测病毒的制备：加0.01 ml 800 μg/ml polybrene至1 ml 待测病毒上清中，通过0.45 μm 滤器过滤。
2. 含有选择标记的待测病毒的制备：加0.01 ml 800 μg/ml polybrene至1 ml 待测病毒上清中，通过0.45 μm 滤器过滤。
3. 含有选择标记的阳对照的制备：制备1 ml 无辅助病毒的病毒原液与10~100 CFU辅助病毒原液的混合液。加0.01 ml 800 μg/ml polybrene，通过0.45 μm 滤器过滤除菌。
4. 阴性对照病毒原液的制备：制备1 ml 无辅助病毒的病毒原液，加0.01 ml 800 μg/ml polybrene，通过0.45 μm滤器过滤除菌。
5. 用各病毒原液感染培养皿上的细胞。将感染后的3个培养皿置于37℃ CO2培养箱中温育1~3 h以利于吸收，加4 ml DMEM-10培养至细胞汇片。
6. 将细胞按1：50分传于新的6 cm 培养皿中。3个培养皿中每个仅传一个培养皿，弃去原来感染的细胞的无用的部分。使polybrene的终浓度在2 μg/ml 培养至细胞长到50%~90%汇片。
7. 弃去培养液换以半量的新鲜DMEM-10。再培养2~3天。
8. 收获生长汇片的细胞的最终的上清。经0.45 μm 滤膜过滤，加polybrene至终浓度8 μg/ml。保存于-70℃~ -80℃，或立即用于滴定及分析标记抗性。
9. 在上清滴定前1夭，将新鲜的未经感染的NIH 3T3细胞按1：10或1：20分传于3个6 cm 培养皿中。用各种上清1 ml 感染口NIH 3T3细胞，并进行滴定的各步操作。如果出现了几千个neo抗性的克隆就说明原始的待测病毒原液中污染了辅助病毒。
9. 在上清滴定前1夭，将新鲜的未经感染的NIH 3T3细胞按1：10或1：20分传于3个6 cm 培养皿中。用各种上清1 ml 感染口NIH 3T3细胞，并进行滴定的各步操作。如果出现了几千个neo抗性的克隆就说明原始的待测病毒原液中污染了辅助病毒。
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