质粒DNA小量纯化试剂盒提取质粒DNA

【基本原理】

此试剂盒用于质粒DNA小量纯化。该试剂盒采用了传统的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需1小时便可完成。

使用本试剂盒可从1-4ml 的过夜培养的菌液中纯化得到1～20μg的高纯度质粒DNA，此质粒DNA可直接用于DNA序列分析以及各种酶促反应等。

【器材】

1．离心机

2. Spin Column

3. Collection Tube (2ml)

*1初次使用试剂盒时，请将RNase A1全部加入到SolutionI中，混合均匀后4℃保存。

*2若出现沉淀，请于37℃保温溶解，待恢复至室温后使用。

*3 Elution Buffer组成：2.5mmol/L Tris-Cl(pH 8.5)。

【操作方法】

1．大肠杆菌的培养。

从平板培养基上挑选单菌落接种至1～4 ml的含有抗生素的液体培养基中，37℃过夜培养。

注:培养液不宜过量，培养液过量时，会因菌量太大而溶菌不充分，纯化时会影响质粒的纯度。

2．取 1～4 ml的过夜培养菌液，12 O0O rpm离心2min，弃上清。

3．用250μl的Solution I （含RNase A1）充分悬浮细菌沉淀。

注:注意不要残留细小菌块，可以使用振荡器（Vortex）等剧烈振荡使菌体充分悬浮。

4．加入250μl的Solution II 轻轻地上下翻转混合5～6次，使菌体充分裂解，形成透明溶液。

注:此步骤不宜超过5min。

5.加入400μl的4℃预冷的Solution III ，轻轻上下翻转混合5～6次，直至形成紧实凝集块，然后室温静置2min。

6．室温 12 000 rpm 离心5min，取上清。

注:此时4℃离心不利于沉淀沉降。

7．将试剂盒中的 Spin Column按置于 Collection Tube 上。

8．将上述操作 6的上清液转移至 Spin Column 中，360Orpm 离心 1min （如Spin Column中有液体残留，可适当提高离心速度，再离心1min ），弃滤液。

9．将500μl 的Rinse A加入Spin Column中，3600rpm离心3OSec ，弃滤液。

10．将700μl的Rinse B加入SPin Column中， 360Orpm 离心3OSec，弃滤液。

11．重复操作步骤10，然后 12000 rpm再离心 1min。

12．将Spin Column按置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入 60 μl的水或洗脱液，室温静置1min。

注:把水或洗脱液加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。

13．12000 rpm 离心1min 洗脱收集DNA。