片段凝胶回收：试剂盒回收(离心法)

1、在长波紫外灯下切下含有目标DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸干凝胶表面的液体并切小。计算凝胶的重量，该重量作为一个凝胶体积（如如100mg=100ul）。

2、根据凝胶的浓度，加DE-A 液

凝胶浓度 DE-A溶液体积

≤1.0% 3个凝胶体积

≤1.5% 4 个凝胶体积

≤2.0% 5 个凝胶体积

混匀后于75℃加热，（低熔点琼脂糖凝胶于45oC加热），间断混合，直到凝胶熔化（6-8分钟）。

3、加0.5个DE-A体积的DE-B溶液，混匀（是否需调整PH值，见注意事项1）；当分离的DNA片段小与400bp 时，加入异丙醇至终浓度为

4、吸3中的混合液，转移到DNA制备管，3600rpm离心1分钟。如制备管中有残留，适当提高速度，再离心1分钟，去滤液

5、将制备管置回离心管，加0.5ml W1溶液，3600rpm离心30,弃滤液

6、将制备管置回离心管，加0.7ml W2溶液，3600rpm离心30,弃滤液，重复一次； （W2中含有酒精，应保证瓶子密封。）

7、将制备管置回离心管，最高速度离心1分钟

8、将制备管置洁净的1.5 ml 离心管中，在DNA制备膜正中央加25ul水或洗脱液，室温静置1分钟。最高速度离心1分钟洗脱

注意事项

1、此法适合从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA,用其他缓冲液时，加DE-B溶液后，溶液的PH要调整到6.5以下

2、勿将DNA长时间暴露在高温下，线型DNA于高温条件下易水解。勿将凝胶长时间暴露在紫外灯，减少紫外灯对DNA的损伤

3、步骤中的凝胶必须完全熔化，否则将严重影响DNA的回收效率

4、步骤4中吸回滤液到DNA制备管中再吸附一次，可提高回收效率。将洗脱液或水加热到60℃，可提高回收效率。（重要）

5、分子呈酸性，建议在洗脱液中保存。（试剂盒中提供的洗脱液好像对PCR有某种抑制作用。）