质粒DNA的分离、纯化和鉴定（三）

11、将树脂/DNA 混合液抽干后,加13ml柱子洗脱溶液至离心管中, 对管底部的树脂/DNA 进行洗脱(柱子一边旋转一边加入洗脱液)，并加入柱子中。

12、真空抽干所加入的洗脱。

13、 再加12ml柱子洗脱液进柱子并抽干。

14、 加入5ml 80％乙醇漂洗柱中的树脂, 柱子真空抽干后将柱子放入用户提供的离心管中,2500rpm(1300g)离心5分钟。

15、 取出柱子，真空抽干5分钟,再将柱子放入系统中所提供的离心管中，2500rpm(1300g)离心5分钟。

16、在柱子中加入1.5ml 65-70℃预热过的灭菌重蒸水或TE,1分钟后2500rpm(1300g)离心柱子/离心管5分钟。

17、 取出柱子,离心管中溶液即为提取的质粒DNA ,可以直接放在离心管中,盖上盖子，储存在4℃或-20℃备用。

[注意]

1. 在使用之前,系统所提供的柱子洗脱液按1:1加入125ml 95％乙醇。

2. 纯化树脂必须混匀后再用.

（三）Sephrose 2B柱纯化质粒DNA

碱法提取的质粒DNA 即使用RNA酶处理,仍会含有少量RNA。当有些试验需无RNA污染的DNA 制品时,则需进行进一步纯化。一般常用Sepharose 2B或Sepharose 4B进行纯化,该方法具有快速,条件温和,重复性好,载体物质可以再利用等优点,因而已广泛用于质粒DNA 纯化。