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DNA实验

牙签法小量制备质粒DNA

2024-10-16 DNA实验 加入收藏
用牙签从琼脂培养基上挑取的菌落可直接用于制备质粒DNA。所得的闭合环状DNA往往杂质太多,不能作为大多数限制酶的底物。但是,牙签法也有很多用途,例如,它可用来鉴

用牙签从琼脂培养基上挑取的菌落可直接用于制备质粒DNA。所得的闭合环状DNA往往杂质太多,不能作为大多数限制酶的底物。但是,牙签法也有很多用途,例如,它可用来鉴定转化后含重组质粒的克隆,用来估计转化子中质粒的大小,用来比较在相同宿主中不同质粒拷贝数的多少。待测重组子中插入的片段的性质可用Southern杂交及聚合酶链反应(PCR)加以确定。

以下介绍的简单操作方法是Barns修订的方法(1977),它对于大菌落(直径2~3mm)很有效,而且所获DNA的量足够琼脂糖电泳时一个泳道的上样量。


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