RAPD

一、 材料 　　不同来源的DNA(50ng/ul)。

二、设备 　　PCR仪，PCR管或硅化的0.5ml eppendorf管，电泳装置。

三、试剂 　　1、随机引物(10mer) (5umol/L)：购买成品。 　　2、Taq酶：购买成品。 　　3、10xPCR 缓冲液：配方见第八章。 　　4、MgCl2 ：25mmol/L。 　　5、dNTP：每种2.5mmol/L。

四、操作步骤： 　　1. 在25ul反应体系中,加入 　　　　模板DNA 1ul (50ng) 　　　　随机引物 1ul (约5pmol) 　　　　10xPCR Buffer 2.5ul 　　　　MgCl2 2ul 　　　　dNTP 2ul 　　　　Taq酶 1单位（U） 　　　　加ddH2O 至 25ul 　　混匀稍离心, 加一滴矿物油。 　　2. 在加热至90℃以上的PCR仪中预变性94℃ 2分钟, 然后循环: 94℃ 1分钟， 36℃ 1分钟， 72℃ 1分钟，共40轮循环。 　　3. 循环结束后, 72℃ 10分钟，4℃保存。 　　4. 取PCR产物15ul加3ul上样缓冲液(6x)于2% 琼脂糖胶上电泳, 稳压50-100Ｖ（电压低带型整齐， 分辨率高）。 　　5. 电泳结束，观察、拍照。

[注意] 1、电泳时一般RAPD带有5-15条, 大小0.1-2.0kb。2、 特异性的DNA带可以克隆作为一个新的分子标记应用。