用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线

比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比关系，利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值)，用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量。

实验设正常生长、加酸抑制和加富培养等三种处理，以了解细菌在不同生长条件下的生长情况。 

1. 活材料：大肠杆菌(E.coli)。

2. 培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支(每支10 mL)，浓缩5 倍的牛肉膏蛋白胨培养基1支。无菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。

3. 器材：1 mL无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、标签等。

1. 接种
取13支装有牛肉膏蛋白胨培养液的试管，贴上标签(注明菌名、培养处理、培养时间、组号)。按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2 mL的大肠杆菌培养液，接种后，轻轻摇荡，使菌体混匀。另一支不接种的培养管注明CK(对照)。

2. 培养
将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1．5、3、4、6、8、10、12和14 h后取山，放冰箱中贮存，待测定。加酸处理。取出经4h培养的另二支培养管，按无菌操作法加入1 mL无菌酸溶液，摇匀后放回摇床上，继续振荡培养，于培养8 h和14 h后取出放冰箱中贮存，待测定。加富营养物处理。余下的二支培养管于培养6h后取出，按无菌操作法加入浓缩5倍的牛肉膏蛋白胨培养液1 mL，摇匀后，继续进行振荡培养，于培养8 h和14 h后取出，放入冰箱中贮存，待测定。

3. 比浊
将培养不同时间、形成不同细胞浓度的细菌培养液进行适当稀释，使光密度值在0.0-0.4范围内，以未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基调零点，在光电比色计上，选用400-440nm波长的滤光片进行比浊，从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。

4. 可选步骤

将大肠杆菌接入装有牛肉膏蛋白胨培养液的小试管中(试管要能插入放比色杯的比色槽内)。37℃下振荡培养，分别在0、1.5 、3、4、6、8、10、12和14 h取出，以未接种培养液调零点，在光电比色计上比色。比色时应自制一个暗盒将培养管和比色槽罩住，以形成一个暗室。

以细菌悬液的光密度值(OD)为纵坐标，培养时间为横坐标，给出大肠杆菌在正常生长、加酸处理和加富培养三种条件下的生长曲线。

如果我们将上述培养0，1.5，3，4，6，8，10，12，14h的细菌悬液用稀释平板测数法进行测数，测出不同时间的含菌数，以菌悬液比浊的光密度值为横坐标，以细菌的数量为纵坐标，绘制一标准曲线，这样在测得了任一培养时间的菌悬液光密度值后，就可以在此标淮曲线上查出含菌数。这种方法已在工业上广泛采用，它可以节省许多稀释平板测数的时间， 直接用比浊法测得的光密度值查标准曲线以了解各个培养时期的菌数消长情况。 

1.细胞生长需要在适宜的温度和PH值下，每个细菌的生长条件不同，需要对不同种类的细菌进行不同条件的处理。

2. 大肠杆菌是无需氧型细菌，需要对大肠杆菌的环境进行控氧。