恒河猴肾细胞

 细胞培养说明书

细胞名称  LLC-MK2；恒河猴肾细胞生长特性  贴壁培养条件  MEM+10%FBS+1%P/S培养环境  37℃   5% CO2，,95% AIR传代比例   1:2传代，2~3天换液冻存条件   90%FBS+10%DMSOQC检测    支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

1、恒河猴肾细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

2、恒河猴肾细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

3、恒河猴肾细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含6ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用6ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；