醋酸纤维膜电泳操作方法

醋酸纤维膜电泳是一项简便而又迅速的方法。它的优点是：①电泳区带分离清楚，比琼脂 平板电泳分辨率高;②可以定量;③样品用量少，只需要几微升即可。

(一)材料与试剂

1.pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液

2.0.5%氨基黑染色液

3.透明液：冰醋酸 3 份 ;95%乙醇 2 份 混合即可

4.醋酸纤维膜

(二)操作方法

1.将醋酸纤维膜条浸于巴比妥缓冲液中，浸透后用竹镊子夹到滤纸上，吸去过多的水分。将膜的光滑面向下搭在电泳槽 两侧的滤纸桥上，注意搭平。

2.加样 用微量加样器于负极端1.5cm处加样1µl～3µl，注意样品要成一条直线且垂直方向。也可用血球计数板盖玻片蘸取样品轻轻点上。

3.电泳 电压10V/cm～15V/cm或0.4mA/cm～0.6mA/cm电泳45min～60min，至电泳区带展开约2.5cm～3.5cm时，关闭电源。

4.染色 将膜浸于氨基黑染色液中，染色数分钟。

5.透明 将染色的醋酸纤维膜浸于透明液中，漂洗5min ~10min，至背景呈乳白色为止。为了防止膜上出现许多气泡，可以逐渐升高透明液浓度10%、20%以至30%。

6.结果观察及保存 透明后，将膜贴于玻璃上，干后取下，即可观察结果并保存。

7.定量 将各区带剪下，分别浸于4Mol/L NaOH 4ml中，振摇数次，约2h，色泽被浸出，于580nm～620nm比色，测出各区带的OD值。同时剪一块大小相似无蛋白的透明膜同样处理，做为对照。

计算各区带蛋白含量百分比(以血清为例)

总OD值T=A α1 α2 β γ

白蛋白%=A/T×100%

以此类推。

(三)注意事项

1.醋酸纤维膜孔隙小，含水量少，且较薄，因此它对热很敏感，故应注意控制电压、电流。

2.样品不可过多，只需几微升即可。

3.加样一定要呈直线、垂直、分布均匀，这样泳动的区带整齐、不歪。

4.注意醋酸纤维膜的质量，浸泡很久仍有大块白色硬点者可弃之不用。