小鼠视网膜神经节细胞 (RGC-5)

小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)介绍：小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)是应用Ψ2E1A病毒转染出生后1d大鼠RGC获得的永生细胞株

小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)特性:

1） 来源：小鼠

2） 形态：上皮细胞样

3） 含量：>1x106 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装

运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm 培养皿或者T25 培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)用途：仅供科研使用。

小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1) F-12(GIBCO,货号11765-054)，90%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，10%。

2) 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm 皿中，加入约8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3 步骤进行，最后的重悬液使用血清。加DMSO 至最终浓度为10%，加入DMSO 后迅速混匀，按每1ml 的数量分配到冻存管中。明舟生物（mingzhoubio）按每个冻存管细胞数目大于1X106 个细胞冻存。

注意事项：

1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。