溶菌酶的制备、纯化和鉴定原理和方法

实验概要 制备、纯化和鉴定溶菌酶

实验原理

溶菌酶,全称为1,4-β-N-溶菌酶,又称粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶,属于α-乳白蛋白家族。人们对溶菌酶的研究始于上世纪初,英国细菌学家Fleming发现人的唾液、眼泪中存在有溶解细菌细胞壁的酶,因其具有溶菌作用,故命名为溶菌酶；此后人们在微生物、植物、无脊椎动物和高等动物中也发现了溶菌酶的存在。其中鸡蛋清溶菌酶的研究和应用已相当深入和广泛。另外随着基因工程技术的发展，通过人工合成基因，用微生物发酵生产人溶菌酶的研究也正在深入进行之中。

鸡蛋清溶菌酶是由129个氨基酸残基组成的碱性球蛋白,单一肽链，分子量为14388，分子内含有4对二硫键。由于其含的碱性氨基酸残基比酸性氨基酸残基多，所以它的等电点高达11左右，等电点约为10.5~11，最适温度为50℃，最适pH为6~7左右。鸡蛋清中的溶菌酶的含量约占蛋白质总量的3.4%~3.5%。

溶菌酶既是药品又是保健品，还是生化药物中理想的药物酶，国外已经开始利用于药物制剂、食品和饮料的添加剂、生化 试剂 和医学诊断剂等。溶菌酶在医药、食品防腐和生物工程中应用非常广泛。溶菌酶是一种糖苷水解酶，具抗菌消炎、抗病毒、增强免疫力等多种药理作用，临床上常用于五官科各种炎症、扁平疣、传染性软疣、寻常性疣等各种皮肤病的治疗，还可用于预防和治疗病毒性肝炎，尤其对输血后肝炎和急性肝炎的效果较为显著。另外人体溶菌酶还可作为多种疾病的诊断指标。

主要 试剂

固体硫酸铵；10%硫酸铵；1mol/L HCl；1mol/L NaOH； 聚乙二醇；0.15mol/L pH 6.5的磷酸缓冲液；0.1mol/L HCl；0.025mol/L KCl-0.1mol/L HAc；30% Acr/Bis；10% SDS；1.5mol/L Tris-HCl (pH 8.8)；0.5mol/L Tris-HCl (pH 6.8)；TEMED；10%过硫酸铵；5*Tris-Gly(pH=8.3)电泳缓冲液；2*样品处理液；染色液；脱色液

主要设备 精密pH试纸；布氏漏斗；磁力搅拌器； 离心机 ；透析袋；玻璃层析柱Bio-Rad层析系统；Bio-Rad垂直电泳系统

实验材料 新鲜鸡蛋若干只；724型酸性阳离子交换树脂；Sephadex G-50 ；蓝色葡聚糖-2000