关于bsa标准曲线的制作方法讨论

它们都是BSA

1、选择应用考马斯亮蓝方法测蛋白质量，做BSA 标准曲线步骤时已经测得梯度蛋白量的吸光值。想求助：在excel中怎样做标准曲线。

Q1、很简单的，将蛋白质浓度放在一列，相应的吸光度放在一列，将两列选中后，选择插入图形，选散点图，然后在插入的图形上的点右击选择添加趋势线，并勾选显示公式和R值，即可得到方程式。

Q2、用梯度蛋白量和吸光值先做出散点图，然后点击选中直线，在直线处点击鼠标左键，出现“添加趋势线”，点击进入，在“类型”菜单中选择“线性”，在“选项”菜单中选择“显示公式”“显示R2值”，点击“确定”，图中即出现线性方程和R2，此方程即为标准曲线方程。

2、如何测BSA 的标准曲线?配置BSA 标准溶液时，需要精确浓度到小数点后四位吗?

一般3个9以上就可以了，我们实验室一般认为99.98%就足够。

可以的，要注意几点，一个是配置高浓度原液，而后在其基础上稀释；二是充分震荡，每个步骤都要充分震荡；三要选择比较好的蛋白测定试剂盒，能用进口的就不要用国产的!

3、为什么BSA 可以用来做标准曲线而不是选其他蛋白?

Q1、分子量68KD。BSA 用的多主要是便宜，其他一些纯蛋白是非常贵的，差价几万倍都是可能的。

4、BSA是否每次做标准曲线都要重配?

Q1、不用，你可以一批配100ml，然后分装成小管冻存起来，以后每次用的时候取一只，这样可以避免多次配置所产生的差异，使用也方便

Q2、书上写一般情况下都是要做标曲的,但是不做的话差别也不是太大,但是要精确的话还是得做标曲.

5、我用考马斯亮蓝染色的方法作BSA标准曲线，怎么也做不出来!4mg/ml,5mg/ml,6mg/ml,7mg/ml,8mg/ml,10mg/ml的 bsa在595nm下的吸光值没有明显的区别，还出现浓度越大，吸光值越小的现象，真是令我哭笑不得，请高手指点，谢谢!

Q1、1,看看你的考马斯亮蓝是否配的有问题，注意配好后必须用慢速滤纸过滤，保证滤液中没有蓝色沉淀(会影响OD595)。

2，你的BSA浓度太高了，测定是OD595会很大。在测定光吸收时，测量值的准确度数范围是：0.1-0.3。读数大于0.5时就不准了。

3，BSA要现用现配，不可久放。

以下测量方法仅供参考：

取21支试管做三组平行(每组7支)：

向7支试管中依次加入：

(1)考马斯亮蓝 各5ml；

(2)分别加入0.15mol的NaCl 0.1, 0.09, 0.08, 0.07, 0.06, 0.05, 0.04ml；

(3)分别加入1.0mg/ml的新配的BSA 0, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06ml；

混匀后，在595nm处测光吸收，读数大部分在0.1-0.3之间。

注意最好在加入BSA 5-20min内测完，此时间内颜色最稳定。

然后三组求平均，用蛋白含量对OD595作图，线性拟合后，一般得到直线的R>0.99,严格要求应使R>0.999.

在测量蛋白浓度时，可先将其稀释为0.5-2mg/ml 左右，加入0.02-0.08ml；即可得到一个较好的读数(一般在0.1-0.3之间)。

Q2、你的标准曲线范围有问题,BSA浓度从0.1~1mg范围内选择,那样的浓度都是超出量程的,测了也没用.还有,机器的量程是多少你没说,吸光值在0.1~1范围内还是比较准确的,这还是进口设备,国产的量程有效范围更窄.自己重新设计实验吧