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SDS-PAGE检测外源蛋白的表达实验操作步骤
[实验原理]SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS—PAGE)是蛋白分析中最经常使用的一种方法。它是将蛋白样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠(SDS)以及巯基乙醇一
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蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作方法
【材料与试剂】(1)2SDS凝胶加样缓冲液(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳槽和电泳仪(3)加样器和吸头等(4)水浴锅【操作方法】(1) 把上述处理的样品按1:1(V/V
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Native-PAGE常见问题及其解析锦集
1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 时预电泳是怎么回事的?预电泳时要加6DNA上样缓冲液吗?电泳1-2小时再加结合反应产物吗?预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体
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双向电泳蛋白点的切取和保存及其注意事项
1. 用 PDQuest软件 或肉眼比对,找出感兴趣的蛋白点,并做好标记和记录。2. 用 MilliQ水冲洗胶 2 次。3. 用色谱纯甲醇和 MilliQ水冲洗
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双向电泳各部分操作大全
1. 总的策略① 化学试剂纯度要高,至少是分析级,目前国产试剂达不到纯度要求 ② 使用去离子水(电导<2uS) ③ 尿素和丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺需新鲜配制
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IEF/SDS-PAGE双向电泳
1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子 量差异建立了IEF/SD S-PAGE双向电泳。其中IEF电泳(管柱状)为第一向
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双向电泳溶液配制大全
A. 裂解液 (lysis solution) (8M Urea, 4%CHAPS, 2% Pharmalyte3-10, 40 ml)Final concen
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RNA变性凝胶电泳技术方法
RNA电泳包括非变性和变性凝胶电泳 两种,非变性电泳可以分离不同分子量大小的RNA,由于RNA分子具有二级和三级结构,这些结构会影响电泳结果,所以分变性电泳无法
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SDS-PAGE蛋白质电泳常见问题分析
SDS-PAGE电泳主要利用聚丙烯酰胺 的分子筛效应分离蛋白质和核酸,SDS-PAG蛋白质电泳分析可从蛋白质亚基分子量的大小就分离蛋白质。几乎所有蛋白质电泳分析
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变性梯度凝胶电泳(DGGE)实验操作技术方法与步骤
变性梯度凝胶电泳 主要分离原理是利用DNA链的熔解性质达到分离目的,低熔点和高熔点的DNA局部解链的程度不同,分子的迁移速率不通过,进而分离。一、实验原理变性梯
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醋酸纤维膜电泳操作方法
醋酸纤维膜电泳是一项简便而又迅速的方法。它的优点是:①电泳区带分离清楚,比琼脂 平板电泳分辨率高;②可以定量;③样品用量少,只需要几微升即可。(一)材料与试剂1
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关于等点聚焦不得不看的知识点
等点聚焦电泳主要是依据不同的蛋白质分子 等电点不同而对蛋白质进行分离的技术。本文主要等点聚焦电泳中对电聚焦的优缺点、等点聚焦原理、仪器与试剂、两性电解质、密度梯
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电泳仪简介
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类,自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电
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二维电泳常见问题及其解答
二维电泳即双向电泳,是蛋白质分析常用的技术手段。第一向等电聚焦电泳:根据蛋白的等电点分离蛋白质;第二向SDS-PAGE电泳:根据蛋白分子 量的大小分离蛋白质。本
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高效毛细管电泳(HPLC)的基本原理
高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE)是近年来发展起来的一种分离、分析技术,它是凝胶电