异硫氰酸胍法

异硫氰酸胍法提取制备模板核酸此法主要用于RNA的提取.标本为组织细胞及血清等.

　　1.异硫氰酸胍消化液

　　异硫氰酸胍4mol/L 　　柠檬酸钠(PH7.0)25mmol/L 　　十二烷基肌酸钠0.5% 　　β-巯基乙醇0.1mol/L

　　2.消化方法:用50～100ul细胞悬液及血清，加等体积的异硫氰酸胍消化液振混匀 后，或65℃1小时，或室温放置数分钟，然后加1/10体积的3mmol/L pH5.2的醋酸钠缓 冲液，再加等体积的酚:氯仿，用力振摇约10s，10000r/min，离心5min，取上清加等 体积异丙醇-20℃放置3h后，14000r/min离心15min，沉定用75%冰冷乙醇离心洗涤1～ 2次，真空干燥，沉淀用TE缓冲液溶解即可用于逆转录PCR扩增，或放-20℃保存.