RNA 的制备与分析

RNA:主要由四种核糖核苷酸组成，即腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）、尿嘧啶（U）。天然的RNA并不象DNA那样呈双螺旋结构，而是单链线形分子。只有局部区域为双螺旋结构（约占RNA分子的50%）。RNA分子中的核苷酸至少75个，多的可达数千个。

RNA的分类：（1）信使RNA（mRNA）（2）转移RNA（tRNA）（3）核糖体RNA（rRNA）（4）小RNA（snRNA）

常用的RNA分析方法：（1）RT-PCR（Reverse Transcription PCR）（反） 逆转录聚合酶链反应（2）原位杂交（In situ hybridization）（3）Northern Blot（4）RNA斑点和狭线杂交（5）S1核酸酶作图法（6）引物延伸法。

一、RNA的提取与纯化：

（一）控制RNA酶的活性：

1、控制污染：

（1）专用的RNA操作室、专用器械。

（2）操作时戴口罩、帽子、手套。

（3）实验用器皿、吸头、离心管应为新的。

（4）所配制的水溶液，尽可能用DEPC处理。

2、已污染RNA酶的器具的处理

（1）在180℃的高温下干烤8小时或更长时间。

（2）氯仿冲洗。

（3）双氧水浸泡。

（4）0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）水浸泡。

3、常用的RNA抑制剂：

（1）焦磷酸二乙酯（DEPC）：一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂，通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环反应从而抑制酶的活性。

（2）异硫氰酸胍：最有效的RNA酶抑制剂。在裂解组织细胞的同时，也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中分离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。

（3）氧钒糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物，与RNA酶结合后几乎能完全抑制RNA酶的活性。

（4）RNA酶的蛋白抑制剂（RNasin）：从人胎盘中分离出来，可以和多种RNA酶结合，使其失活。

（5）其它：SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定的抑制作用。