免疫球蛋白提取：连续提取免疫球蛋白

  （一）试剂及配制 1．饱和硫酸铵液 2．各种磷酸盐缓冲液 ⑴ 0.2mol/L原液 A液：0.20Mol/L NaH2PO4液 NaH2PO4·H2O 31.20g H2O 1 000ml B液：0.20Mol/L Na2HPO4液 Na2HPO4·12H2O 71.7g H2O 1 000ml ⑵ 0.10Mol/L pH8.0PB液 A液： 53ml B液： 947ml H2O 加至 2 000ml ⑶ 0.005Mol/L pH8.0 PB液 取0.10Mol/L pH8.0 PB液100ml，加H2O至2 000ml ⑷0.025 Mol/L pH8.0 PB液 取0.10Mol/L pH8.0 PB液500ml，加水至2 000ml。 ⑸ 0.035 Mol/L pH8.0 PB液 取0.10.1 Mol/L pH8.0 PB液700ml，加水至2 000ml。 ⑹ 0.10Mol/L pH5.8PB液 A： 920ml B： 80ml H2O 加至 2 000ml ⑺ 0.40Mol/L pH5.2pB液 a液.0.40Mol/L NaH2PO4液 NaH2PO4·2H2O 62.40g H2O 加至 1 000ml B液.0.40Mol/L Na2HPO4液 Na2HPO4·12H2O 143.4g H2O 加至 1 000ml 取a液 960ml b液 40ml 混合即可。 ⑻ 0.01 Mol/L pH8.0PBS 液 取0.10Mol/L pH8.0 PB液 100ml NaCl 8.20g H2O 加至 1 000ml 3．DEAE-纤维素(细粒级) 4．SephadexG200 （二）操作方法 1．取一定量的血清，加等量的生理盐水，然后逐渐滴加饱和硫酸铵溶液，使成40％的饱和度,静置30min。 2．10 000r/min离心10min，去上清。 3．加入一定量的生理盐水，使沉淀溶解，再加入饱和硫酸铵溶液，使成40％饱和度。10 000r/min离心10min，去上清。 4．再重复步骤3一次。 5．将沉淀以少量生理盐水溶解，透析，除盐浓缩。 6．制备DEAE-纤维素柱，以0.005Mol/L pH8.0PB液平衡。 同时制备SephadexG200凝胶柱，以0.01Mol/L pH8.0PBS液平衡并进行洗脱。 7．以0.005Mol/L pH8.0PB液洗脱，得蛋白液为IgG。 7． 以0.025 Mol/L pH8.0PB液洗脱，得蛋白主要是IgE，再过SephadexG200凝胶柱，收集第一峰即为纯IgE。 8． 以0.035 Mol/L pH8.0PB液洗脱，得蛋白主要是IgA，再过SephadexG200凝胶柱，收集第一峰即为纯IgA。 10．以0.10Mol/L pH5.8PB液洗脱，洗脱液主要有IgM、IgG及白蛋白的混杂物。 11．以0.40Mol/L pH5.2PB液洗脱，得蛋白液主要是IgM。过SephadexG200，收集第二峰即为纯IgM。