质谱的试剂用品、实验操作、仪器和样品选择方法

质谱法在蛋白分析鉴定等实验中具有不可忽视的作用，本文对其中的样本制备试剂用品、实验操作、质谱仪的选择、样品的选择等方面进行详细的介绍。另外，这方面的FAQ 、著名网站 等信息可点击蓝色的字体查看。

试剂耗材：

Milli-Q water、Non-powder gloves、Face mask、Hat、10μl and 200μl tips(eppendorf)、Menthol(Fisher M/4056/17)、Acetonitrile(Fisher A/0626/17)、Trypsin (Promega V528)、Trypsin resolve solution(Promega V530)、Ammonium bicarbonate(Sigma A6141)、ZipTip μC-18(Millipore ZTC18M096)、TFA(GE HealthCare)、0.2ml and 0.5ml EP tube(eppendorf)、50ml EP 0.5ml EP(Corning)

用具仪器：

真空干燥仪、水浴锅、10μ和200μ移液器 、废液缸、制冰和装冰设备、200μ管架、剪刀、能装放置了200μ管管架的塑料盒、200μ管离心机。

准备：

1. 0.2ml EP管三套，MilliQ水和甲醇各涮一遍，真空干燥。

2. 50ml EP管六支，MilliQ水和甲醇各涮一遍，真空干燥。

3. 胰酶储液制备：使胰酶粉末沉落瓶底，用100μ胰酶重旋液溶解，用0.5ml EP分装成5μl。

4. 50ml 100 mM NH4HCO3。

脱色酶切：

1. 切点将200μl tip头剪成吸口1.5mm左右的直径，MilliQ水涮洗一遍，吸100μl水后戳取斑点，将胶粒打入0.2ml EP管中，吸干水后再用MilliQ水洗涤两遍，吸干。

2. 脱色 180μl 50%MeOH/50mM NNH4HCO3脱色两次以上，每次半小时;180μl MilliQ水洗涤5分钟，180μ 50% ACN洗涤5分钟，180μl 100%ACN洗涤5分钟;真空干燥半小时。

3. 酶切

① 25 mM NH4HCO3稀释胰酶至12.5μg/μl;每管胶粒加入胰酶3μl，冰浴15分钟后洗掉多余的胰酶;再加入3μl左右25 mM NH4HCO3至覆盖胶粒。

② 小心将EP管倒转，将整个EP管架放入塑料盒中后放入37度水浴锅酶切16小时。

③ 将塑料盒从37度水中捞出，注意不要倒掉水，冷却至室温。

④ 加入10μl 25 mM NH4HCO3，震荡15分钟，离心后收集至新管;

加入10μl 2.5%TFA，震荡5分钟，收集至上管;

加入10μl 2.5%TFA-50% ACN，震荡5分钟，收集至上管;

加入10μl 100% ACN，震荡5分钟，收集至上管。

⑤ 将此收集液真空浓缩至5-10μl后，加入20μl 0.5%TFA;继续浓缩至10-20μl。

肽段浓缩除盐：

1. 吸10μl 100% ACN，弃之，重复两次;

2. 吸10μl 0.1% TFA，弃之，重复两次;

3. 吹吸样本15次;

4. 吸10μl 0.1% TFA，弃之，重复两次;

5. 吸3μl 0.1% TFA-50% ACN，将此洗脱液转入新EP管。

质谱种类

质谱仪种类非常多，工作原理和应用范围也有很大的不同。从应用角度，质谱仪可以分为下面几类：

有机质谱仪：由于应用特点不同又分为：

① 气相色谱 -质谱联用仪(GC-MS)在这类仪器中，由于质谱仪工作原理不同，又有气相色谱-四极质谱仪，气相色谱-飞行时间质谱仪，气相色谱-离子阱质谱仪等。

② 液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)同样，有液相色谱-四器极质谱仪，液相色谱-离子阱质谱仪，液相色谱-飞行时间质谱仪，以及各种各样的液相色谱-质谱-质谱联用仪。

③　其他有机质谱仪，主要有：基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪(MALDI-TOFMS)，富立叶变换质谱仪(FT-MS)

无机质谱仪，包括：

① 火花源双聚焦质谱仪。

② 感应耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)。

③ 二次离子质谱仪(SIMS)

但以上的分类并不十分严谨。因为有些仪器带有不同附件，具有不同功能。例如，一台气相色谱 -双聚焦质谱仪，如果改用快原子轰击电离源，就不再是气相色谱-质谱联用仪，而称为快原子轰击质谱仪(FAB MS)。另外，有的质谱仪既可以和气相色谱相连，又可以和液相色谱相连，因此也不好归于某一类。在以上各类质谱仪中，数量最多，用途最广的是有机质谱仪。

除上述分类外，还可以从质谱仪所用的质量分析器的不同，把质谱仪分为双聚焦质谱仪、四极杆质谱仪、飞行时间质谱仪、离子阱质谱仪、傅立叶变换质谱仪等。

质谱仪的选择窍门

质谱仪种类繁多，不同仪器应用特点也不同,一般来说，在300C左右能汽化的样品，可以优先考虑用GC-MS进行分析，因为GC-MS使用EI源，得到的质谱信息多，可以进行库检索。毛细管柱的分离效果也好。如果在300℃左右不能汽化，则需要用LC-MS分析，此时主要得分子 量信息，如果是串联质谱，还可以得一些结构信息。如果是生物大分子，主要利用LC-MS和MALDI-TOF分析，主要得分子量信息。对于蛋白质样品，还可以测定氨基酸序列。质谱仪的分辨率是一项重要技术指标，高分辨质谱仪可以提供化合物组成式，这对于结构测定是非常重要的。双聚焦质谱仪，傅立叶变换质谱仪，带反射器的飞行时间质谱仪等都具有高分辨功能。

质谱分析法中的样品选择

质谱分析法对样品有一定的要求。进行GC-MS分析的样品应是有机溶液，水溶液中的有机物一般不能测定，须进行萃取分离变为有机溶液，或采用顶空进样技术。有些化合物极性太强，在加热过程中易分解，例如有机酸类化合物，此时可以进行酯化处理，将酸变为酯再进行GC-MS分析，由分析结果可以推测酸的结构。如果样品不能汽化也不能酯化，那就只能进行LC-MS分析了。进行LC-MS分析的样品最好是水溶液或甲醇溶液，LC流动相中不应含不挥发盐。对于极性样品,一般采用ESI源，对于非极性样品，采用APCI源。

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