β-半乳糖苷酶活性的整体封片免疫组化检测实验-半乳糖苷酶活性的整体封片染色和免疫组化检测

小鼠或鸡的整个胚胎、组织或外植体
磷酸盐缓冲液（PBS) 冰冷 β-半乳糖苷酶固定剂 β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液 β-半乳糖苷酶染色液
5 mL或10 mL的聚苯乙烯或聚丙烯帽盖的试管或1.5〜2 mL的离心管 转动平台 染色用密闭箱 附有盖玻片的下陷载玻片或箱式载玻片 纤光照明的解剖显微镜 显微照相仪

步骤

1)在冰冷的PBS里解剖胚胎或组织。置β-半乳糖苷酶固定剂，室温至合适的时间。以下是固定小鼠胚胎和组织的指导：外植体和E 6.5到E 7.5胚胎5〜10 min； E 8到E 9.5胚胎或尾巴切面 15〜30 min； E 10 到 E 12.5 胚胎 30 min〜1.5 h; E 13 到 E 14.5 胚胎 2 h; E 15.5 或更大的组织则需要解剖出来或切一半，然后固定2 h。新生幼鼠或更大的小鼠的灌注需要在解剖特定组织染色之前进行。

2) 用β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液室温洗涤3次，每次15 min (针对小胚胎或尾巴切面）， 或每次30 min (针对Ell胚胎和大组织），头尾相接地轻柔转动。

3) 将组织置于β-半乳糖苷酶染色液中（室温，30℃或37℃取决于β-半乳糖苷酶表达丰度），在一5 mL或10 mL的帽盖的试管或1. 5〜2 mL的离心管中孵育，以防止蒸发。可以用肉眼或解剖显微镜调节染色程度。

4) 得到预期的信号背景比之后（1〜48 h)，在PBS中洗涤组织3次，每次30 min。

5) 通过解剖镜观察和拍摄样本染色的组织，使用低功率的物镜和来自侧面和顶端的光纤照明。为了得到最好的结果，将组织放置在附有盖玻片的下陷载玻片或箱式载玻片，用足够的PBS覆盖组织。

注意事项

戊二醛、甲醛、脱氧胆酸钠、亚铁氰化钾和高铁氰化物、二甲基甲酰胺、Histoclear、苯 甲酸苄酯、苯甲醇和 Perniount 是危险物质。它们的操作和处理均需按照制造商的指导。

常见问题

分离小鼠胚胎和鸡的胚、组织或外植体，部分固定以保持β-半乳糖苷酶的活性，彻底洗涤去除固定剂，如果有必要可厚切片，在显色底物存在的情况下染色。 接下来，染色组织整体封片照相，样本包埋，切片，显示报道基因的细胞和组织特异性表达。强烈推荐做预备试验，这样可以估计和标准化特定试验和组织的最优化条件