沙土保藏法（菌种保藏实验）

微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。

选用优良菌株，根据生理生化特征干燥菌种使其处于休眠状态或者代谢处于最低的状态，生长繁殖受抑制从而降低变异率。

此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广，效果亦好，可保存2年左右，但应用于营养细胞效果不佳。

一、取河沙加入10%稀盐酸，加热煮沸30分钟，以去除其中的有机质。

二、倒去酸水，用自来水冲洗至中性。

三、烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。

四、另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。

五、烘干，碾碎，通过100目筛子过筛，以去除粗颗粒。

六、按一份黄土、三份沙的比例（或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）掺合均匀，装入10×100 mm的小试管或安瓿管中，每管装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌，烘干。

七、抽样进行无菌检查，每10支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养48小时，若仍有杂菌，则需全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。

八、选择培养成熟的（一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好）优良菌种，以无菌水洗下，制成孢子悬液。

九、于每支沙土管中加入约0．5ml（一般以刚刚使沙土润湿为宜）孢子悬液，以接种针拌匀。

十、放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分，抽干时间越短越好，务使在12小时内抽干。

十一、每10支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长，如出现杂菌或菌落数很少或根本不长，则说明制作的沙土管有问题，尚须进一步抽样检查。

十二、若经检查没有问题，用火焰熔封管口，放冰箱或室内干燥处保存。每半年检查一次活力和杂菌情况。

十三、需要使用菌种，复活培养时，取沙土少许移入液体培养基内，置温箱中培养。