酵母DNA的快速分离
原理根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也
原理
根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取，并且可以用于转化 E. coli。
材料与仪器
酵母细胞
乙醇 酚 氯仿 醋酸钠 STES 缓冲液 TE
酸洗过的玻璃珠
乙醇 酚 氯仿 醋酸钠 STES 缓冲液 TE
酸洗过的玻璃珠
步骤
一、材料
1. 缓冲液及溶液
乙醇
酚：氯仿（1:1, V/V)
醋酸钠（3 mol/L, pH 5.2）
STES 缓冲液（0.2 mol/L Tris-Cl (pH 7.6)，0.5 mol/L NaCl，0.1% (m/V) SDS，0.01 mol/L EDTA，室温保存）
TE ( pH 7.6)
2. 专用设备
酸洗过的玻璃珠（0.4 mm)
3. 细胞和组织
新鲜的琼脂平板培养的克隆或液体的过夜培养的酵母细胞
二、方法
1. 准备用于裂解的酵母细胞。
(1) 平板培养的酵母克隆
使用无菌的接种环将一个或几个大的、新鲜培养的克隆转移到加有 50 μl STES 缓冲液的微量离心管中。
(2) 液体培养的酵母
① 将 1.5 ml 过夜培养的酵母细胞转移到微量离心管中。
② 用最大转速室温下离心 1 min, 收集沉淀下来的细胞。
③ 吸去培养介质，将细胞重悬于 50 μl STES 缓冲液中。
2. 向酵母悬浊液中加入 50 μl 酸洗过的玻璃珠。每管加入 20 μl TE ( pH 7.6)。
3. 加入 60 μl 酚: 氯仿。盖上盖子，振荡 1 min, 使有机相和水相充分混合。
4. 用最大转速室温下离心 5 min。
5. 将上层水相转移到一个新的离心管中。0℃ 下用乙醇沉淀 15 min。
6. 用最大转速 4℃ 下离心 10 min, 收集核酸沉淀。
7. 吸去上清，用 100 μl 水配制的 70% 乙醇洗涤沉淀。用最大转速室温下离心 1 min。
8. 吸去上清。空气中干燥 DNA 沉淀 15 min。将沉淀溶于 40 μl TE（pH 7.6）。
1. 缓冲液及溶液
乙醇
酚：氯仿（1:1, V/V)
醋酸钠（3 mol/L, pH 5.2）
STES 缓冲液（0.2 mol/L Tris-Cl (pH 7.6)，0.5 mol/L NaCl，0.1% (m/V) SDS，0.01 mol/L EDTA，室温保存）
TE ( pH 7.6)
2. 专用设备
酸洗过的玻璃珠（0.4 mm)
3. 细胞和组织
新鲜的琼脂平板培养的克隆或液体的过夜培养的酵母细胞
二、方法
1. 准备用于裂解的酵母细胞。
(1) 平板培养的酵母克隆
使用无菌的接种环将一个或几个大的、新鲜培养的克隆转移到加有 50 μl STES 缓冲液的微量离心管中。
(2) 液体培养的酵母
① 将 1.5 ml 过夜培养的酵母细胞转移到微量离心管中。
② 用最大转速室温下离心 1 min, 收集沉淀下来的细胞。
③ 吸去培养介质，将细胞重悬于 50 μl STES 缓冲液中。
2. 向酵母悬浊液中加入 50 μl 酸洗过的玻璃珠。每管加入 20 μl TE ( pH 7.6)。
3. 加入 60 μl 酚: 氯仿。盖上盖子，振荡 1 min, 使有机相和水相充分混合。
4. 用最大转速室温下离心 5 min。
5. 将上层水相转移到一个新的离心管中。0℃ 下用乙醇沉淀 15 min。
6. 用最大转速 4℃ 下离心 10 min, 收集核酸沉淀。
7. 吸去上清，用 100 μl 水配制的 70% 乙醇洗涤沉淀。用最大转速室温下离心 1 min。
8. 吸去上清。空气中干燥 DNA 沉淀 15 min。将沉淀溶于 40 μl TE（pH 7.6）。
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