单病毒感染OST7-1细胞（T7RNA 聚合酶系统基因表达实验）
简介
本节介绍依赖于在哺乳动物细胞质合成噬菌体T7 RNA聚合酶的瞬时细胞质表达系统。首先，将感兴趣的基因插入质粒中，使其位于T7 RNA聚合酶启动子（PT7）的控制下。在培养过程中，外源基因被高效的 T7 RNA聚合酶转录。这种转染方案适用于分析的目的，因为不需要构建新的重组病毒，所以比较简单。
对于大规模的工作，PT7 操纵的基因可以通过同源重组插入另一个重组痘苗病毒中，使之与 vTF7-3 共同感染悬浮细胞（见「两种重组痘苗病毒共感染细胞」）或感染 OST7-1 细胞(可以持续表达 T7 RNA 聚合酶的稳定细胞系；见「单病毒感染OST7-1细胞」）。表达的蛋白质可以用脉冲标记的方法或用「重组痘苗病毒及其产物的鉴定实验」中叙述的方法分析鉴定，用「离子交换层析实验」描述的方法纯化。
对痘苗病毒/T7 RNA聚合酶杂交表达系统有几种创新的方法，其中的一个新的改进是VOTE诱导的表达系统，它不需要应用两种重组病毒或特殊细胞系（见「利用VOTE系统」）。
操作方法
—— 单病毒感染OST7-1细胞
一、原理
OST7-1 细胞来源于鼠 L929 细胞，能在细胞质中持续表达噬菌体 T7 RNA 聚合酶，因此，应用此细胞系无需用 vTF7-3 感染细胞。
二、材料与仪器
完全 MEM-2.5 培养基 完全MEM-10培养基（含有 400 μg ml Geneticin） 胰酶（2 × 结晶无盐 过滤除菌后冻存于 -20℃）
过滤除菌后冻存于 -20℃
三、步骤
1. 用含有 400 μg/ml G418 的完全 MEM-10 培养基以 1 × 106 个 OST7-1 细胞/孔加入 6 孔组织培养板培养，直至细胞汇片生长（一般过夜）。
含有 G418 的完全 MEM-10 培养基用于维持细胞培养，但 G418 在表达实验中并不需要。
2. 混合等体积的病毒储液（10 pfu/细胞）和 0.25 mg/ml 胰酶，涡旋混匀。温育 30 min，每隔 5～10 min 晃动一次。
3. 将胰酶处理后的病毒用 MEM-2.5 培养基稀释至 2×107 pfu/ml。
4. 用 0.5 ml 的病毒混合液感染 6 孔板中每孔汇片生长的 OST7-1 细胞，温育 1～2 h, 每隔 15～30 min 晃动一次。
5. 每孔加入 1.5 ml 完全 MEM-2.5 培养基，继续培养。
6. 感染 3～24 h 后，分析细胞（见「两种重组痘苗病毒共感染细胞」步骤 1.6 的注解）。
四、注意事项
1. 所有培养都在加湿的 37℃ 5% CO2 培养箱中培养，除非有特殊说明。
2. 与活细胞接触的器械和试剂都应该是无菌的，操作也必须无菌。
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