质粒 DNA 大量制备实验（平衡离心法）
原理这种方法可以得到除去了大多数杂质的高纯度质粒DNA。但它需要使用溴化乙锭，并且需要长时间的超速离心来形成密度梯度。 材料与仪器DNATE 氯化铯 溴化乙锭
原理
这种方法可以得到除去了大多数杂质的高纯度质粒DNA。但它需要使用溴化乙锭，并且需要长时间的超速离心来形成密度梯度。
材料与仪器
DNA
TE 氯化铯 溴化乙锭 NaCl 乙醇
离心机 平衡住
TE 氯化铯 溴化乙锭 NaCl 乙醇
离心机 平衡住
步骤
1. 粗裂解物制备方案最后一步得到的沉淀溶于4 ml TE缓冲液中，加入4.4 g CsCl，溶解后，再加入0.4 ml 10 mg/ml 溴化乙锭。
2. 将溶液转入一个5 ml 的quick-seal快速封口的超离心管中。
3. 酌情往管中加入CsCl/TE溶液，封好离心管。
4. 于20℃，500 000 g离心 3.5 h或于20 ℃，以350 000 g 离心14 h 以上。
3. 酌情往管中加入CsCl/TE溶液，封好离心管。
4. 于20℃，500 000 g离心 3.5 h或于20 ℃，以350 000 g 离心14 h 以上。
5. 首先从管的顶端描入一支针头，然后用带另一 20G针头的3 ml 注射器将质粒带吸出。
6. 进行第二次超速离心，除去混杂的RNA和染色体DNA以获得更高纯度的质粒。
7. 按质粒溶液的1.5~2倍体积装Dowex AG50W-X8柱子，用数倍体积的TE/0.2 ml NaCl溶液清洙和平衡柱子。
8. 用注射器将混合有溴化乙锭的质粒DNA溶液直接加到树脂的顶部，注意不要摇动树脂。
8. 用注射器将混合有溴化乙锭的质粒DNA溶液直接加到树脂的顶部，注意不要摇动树脂。
9. 立即收集流出液，然后用2倍于上样体积的TE/0.2 ml NaCl溶液洗脱柱子两次。
10. 加入2倍体积乙醇于室温或-20℃沉淀质粒DNA，于4℃，以10 000 g 离心 10 min。
11. 沉淀用70%乙醉洗涤1遍，真空干燥，溶解于TE缓冲液，并于4 ℃保存。
注意事项
一、溴化乙锭是一种诱变剂并能造成环境污染，操作时应戴手套，并且妥善处理。
二、为了防止紫外线对眼睛的严重拫伤，应戴紫外防护眼镜或面罩。
二、为了防止紫外线对眼睛的严重拫伤，应戴紫外防护眼镜或面罩。
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