质粒 DNA 大量制备实验（碱裂解法）
原理这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相当决捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。材料与仪器大肠杆菌葡萄糖 Tris EDTA TE NaOH SD
原理
这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相当决捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。
材料与仪器
大肠杆菌
葡萄糖 Tris EDTA TE NaOH SDS 异丙醇 乙醇 乙酸甲
离心机 漩涡混合器 水浴锅
葡萄糖 Tris EDTA TE NaOH SDS 异丙醇 乙醇 乙酸甲
离心机 漩涡混合器 水浴锅
步骤
1. 往2 ml 烧瓶中加入500 ml ，含有适当抗生素的LB培养基，然后加入5 ml 过夜培养的。
2. 带有所需质粒的大肠杆菌培养物，再于37℃培养至饱和状态（OD600≈4）。
2. 带有所需质粒的大肠杆菌培养物，再于37℃培养至饱和状态（OD600≈4）。
3. 于4℃，6 000 g 离心10 min，用4 ml GTE。
4. 溶液重悬沉淀，并转移到一个容积≥20 ml 的高速离心管中。（细菌沉淀可以在-20℃或-70℃无限期保存。）
4. 溶液重悬沉淀，并转移到一个容积≥20 ml 的高速离心管中。（细菌沉淀可以在-20℃或-70℃无限期保存。）
5. 加入1 ml 新配的含25 mg/ml 溶菌酶的GTE溶液，重悬沉淀，于室温放置10 min。
6. 加入10 ml 新配的NaOH/SDS溶液，并且轻轻混匀直至液体变得均一、清亮而粘稠。于冰上放置10 min。
7. 加入7.5 ml 乙酸钾溶液，用吸管轻轻搅拌直至粘稠度下降并形成大的沉淀，于冰上放置 10 min。
8. 于4℃，20 000 g 离心10 min 将上清轻轻倒入至另一个干净的离心管中，如果有可见的飘浮物可用数层纱布过滤。
9. 加入0.6倍体积的异丙醇，颠倒混匀，室溫放置5~10 min。
10. 于室温1500 g 离心10 min。
9. 加入0.6倍体积的异丙醇，颠倒混匀，室溫放置5~10 min。
10. 于室温1500 g 离心10 min。
11. 加入2 ml 70%乙酵轻轻洗涤沉淀，然后短暂快速离心，吸去乙醇，并真空干燥。
12. 沉淀可以在4℃无限期保存。
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