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DNA实验

酚-氯仿法提取石蜡组织中 DNA

2024-05-25 DNA实验 加入收藏
材料与仪器步骤1. 10 mm 厚石蜡切片 10~15 张,置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl,9000


材料与仪器

步骤

1. 10 mm 厚石蜡切片 10~15 张,置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。


2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl,9000 r/min,8 min×3。


3. 脱水无水乙醇 1200 μl,9000 r/min,5 min×3。


4. 打开 Eppendorf 管盖子,将其置于 37℃ 烤箱中干燥 1~2 h。


5. 加裂解液 100μl,混匀后加 20 mg/ml 蛋白酶 K 15~20 μl,终浓度 10 μg/ml 间隔振荡,55℃ 烤箱中过夜。


裂解液配制:1 mol/L Tris-HCl(pH 8.0)2 μl,0.5 mol/L(pH 8.0)EDTA 4 μl,10% SDS(pH 7.2)20 μl,加水至 100 μl。


6. 观察裂解液是否清亮,如不清亮,根据组织量补加蛋白酶 K 3~5 μl,继续消化至裂解液清亮。


7. 加 500 μl Tris 饱和酚,混合至乳状。


8. 10000 r/min 离心 10 min,小心吸取上清液。


9. 加酚和氯仿各 250 μl,混匀,10000 r/min 离心 5 min,小心吸取上清液。


10. 加氯仿 500 μl,混匀,10000 r/min 离心 5 min,取上清液。


11. 加 NaAc(乙酸钠,3mol/L,pH 6.0)70 μl,无水乙醇 700μl,混匀,-20℃ 保存 2 h。


12. 10000 r/min 离心 5 min,弃上清液。


13. 加 70% 乙醇 1 ml,混匀,清洗。


14. 10000 r/min 离心 3 min,弃上清液。


15. 开盖,倒置 Eppendorf 管,室温下干燥。


16. 加 TE 缓冲液(pH 8.0)20~40 μl,55℃,10 min 速溶,置于 -20℃ 冰箱中保存。


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