非同位素分析报道基因活性实验(冻融裂解的细胞的荧光素酶分析)
材料与仪器哺乳动物细胞PBS培养皿 细胞刮子 离心机步骤1. 用PBS分别洗3个60 mm 培养皿中的转染了荧光素酶质粒的细胞。 2. 每只培养皿中加1 m
材料与仪器
哺乳动物细胞
PBS
培养皿 细胞刮子 离心机
PBS
培养皿 细胞刮子 离心机
步骤
1. 用PBS分别洗3个60 mm 培养皿中的转染了荧光素酶质粒的细胞。
2. 每只培养皿中加1 ml 提取缓冲液,立即用橡胶刮子刮下细抱,移至1.5 ml 微量离心管中。离心15~30 s,弃上清。
3. 在细胞沉淀中加100 μl 提取缓冲液,经3次冻融裂解细胞膜。
3. 在细胞沉淀中加100 μl 提取缓冲液,经3次冻融裂解细胞膜。
4. 将裂解的细胞在4℃以最大速度离心5 min,移出上清,分析其荧光素酶的活性。