RbCl超级感受态细胞

一、材料与试剂

1. SOBor2xYT

2. MES

3. 足够80个管子的TFB（50 mL）/400转化DMSO

4. 5 M NaCl

二、仪器

1. 离心机

三、步骤

1. 室温下在5 ml SOB或2×YT中接种菌并且培养过夜。

2. 加过夜培养的菌到500 ml 的SOB或2×YT，其装在4L瓶中以最大限度的透气。加入36 ml 5 M 的NaCl，在30℃下培养。

3. 大约3 h，OD600达到0.5。

4. 离心细胞。取沉淀，吸取多余的液体。

5. 加50 ml 冷TFB重悬细胞，冰上孵育15 min。

6. 准备干冰/乙醇浴（厚度一直）或液氮。

7. 当离心细胞时，加入1.75 ml DMSO。（DMSO不需要灭菌）

8. 冰上孵育细胞10 min，并且在冰上冷冻离心管。

9. 每个离心管加0.5 ml 细胞，迅速将比例管放置于干冰上，细胞在-70°C可以达12个月。

10. 使用100 ul 转化。42°C热激1.5到2 min。